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求求助!wb曝光无条带都是黑点
bamboopiggy
1.确定你的目的蛋白的抗体是好用的,2 试试增大上样量,3,试试增大抗体浓度
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问
请教消化之后,尺寸较大的(>30um)细胞系有什么
土井挞克树
之前园子里的战友做的植物细胞系都比较大。
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问
蛋白修饰实验求助
土井挞克树
37摄氏度恒温比较好,后续用超滤管就可
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问
Western Blot
bamboopiggy
一般10%的胶,可以凑合用,对70多的那个分的好,20多的也能看到,你如果想得到好的图,1.用梯度的预制胶 2, 分别配胶跑
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问
tamoxifen诱导cre表达
bamboopiggy
1.看你想要在小鼠多大的时间诱导,一般是8周的时候,2.注射完,一般24-48h可以取材看一下,这个取决于tamoxifen的浓度(每个公司产的都又差别),一定要做预实验。
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问
ELISA实验
麻黄连翘赤小豆
不可以哦,标曲是看你加样水平的稳定性,如果标曲都加不好,里面的样本很难说是准确的数据
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问
p65和p-p65在接毒后都时间依赖性增加了,但核质分离p65不入核怎么回事啊😭
bamboopiggy
1.确定你核质分离实验是work的,2.一般应该是total的p65不变,而p-p65 增加
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问
长时间不用的蛋白胶下面为什么会结晶
土井挞克树
那个是析出、一般胶都有离子呀,长时间不用析出很正常
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问
WB实验蛋白浓度很低对目的基因的表达有影响吗?
bamboopiggy
wb每孔的上样量,要达到20-40ug,否则你可能连内参都出不来
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问
脑子不好使的人真想不通的WB分组问题
土井挞克树
不可以,你没有验证L与S的关系,如果四组做预实验还是会失败
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问
质蛋白核蛋白各组上样都是10ug。请问这个β-catenin的核质比应该怎么算?应该怎样均一化?
bamboopiggy
读取灰度值,然后胞浆三组先都和各自内参比,胞核也是先和内参比,然后用得到的比值,再每组比。得到的数值,除以ctrl组,就可以了
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问
或者还有什么其他更好的方法证明这个猜想吗?
土井挞克树
你需要排除蛋白的影响,不然猜想不完美
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问
同一个胶,同一组样品,同一个内参,不同的趋势
bamboopiggy
感觉是你的蛋白浓度不齐,你根据acin的量,再调一下。还有就是上样的枪尖,注意一下
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问
RIP实验
土井挞克树
你直接将太小的数值对数处理后再绘图
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问
19kd的蛋白跑WB出现的条带位置和形状不对
郭郭求祥瑞
我也觉得胶有问题,但是下边没有目的条带,会不会是因为三明治结构没有那么紧,可以考虑多加一层白膜,我跑19kd的时候都是用的15%%的
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问
【求助】血清做WB的样本处理及方法
bamboopiggy
你只是要用2x甚至5x的lysis来处理血清,然后就按照正常的wb样品的步骤做就可以。
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问
请问大家做细胞实验是用无动物成分重组蛋白还是用传统重组蛋白
dxy_qfkx8il3
用无动物成分重组蛋白应该也可以,但感觉用传统重组蛋白稳妥一些。
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问
WB出现多条带
土井挞克树
如果说条带不均一可能是一抗浓度没设计好。
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问
Wb做85,55,26,21kd蛋白应该选择多大的分离胶和浓缩胶
土井挞克树
可以分成两部分呀,分开跑的条带清晰,不分开容易混杂
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问
WB条带问题 这个是胶的问题还是上样量的问题啊
土井挞克树
看着像胶的问题,这个胶配的应该稀一些,另外你上样有的跑到轨道外了
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