实验问答22,187,724 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问ASC寡聚化有没有好用的牌子的抗体可以推荐一下啊🥺

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问翌圣生物的10×Tris-Glycine-SDS Running Buffer货号为20319ES76效果如何？

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问我想请问一下做酵母双杂交实验的实验材料是买整个试剂盒划算一点还是单买其中用到的实验材料划算？

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问组织冰冻切片染ros需要pfa固定和蔗糖脱水吗？

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问蛋白的hFc标签和Fc标签一样吗？它们分别是什么啊？？？求助，一直搞不懂

dxy_f2af9zme

Fc 是 IgG 抗体的一段，可以和重组蛋白 A 特异性识别，因此抗体纯化就是利用这个亲和力原理通过蛋白 A 琼脂让凝胶实现的，延伸这个应用我们可以在设计重组蛋白的时候认为加上 Fc 标签，这样就可以通过蛋白 A 琼脂糖实现类“抗体”纯化，目前用的比较多的 Fc 序列来源有人源、兔源、鼠源，即分别为hFc、rFc、mFc，序列是有差异的，特别是做重组免疫原想筛抗体的就需要避开种属，不然免疫的抗体可

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问蛋白分离纯化如何提高表达量且单一并具有活性

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问ASC寡聚化实验求助

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问原核蛋白表达不出来，IPTG条件优化

dxy_f2af9zme

有针对蛋白抗体的话可以先 WB 压一下；还可以调整诱导温度（比如25°C、30°C）、IPTG 浓度（0.5 有点高）。我们一般做表达小试，会考虑 16°C/25°C/30°C/37°C + 0.1/0.2/0.3/0.5/1 IPTG + 8/12/18 h 诱导时间，多个条件调试出最佳表达条件，实在不表达就需要考虑换载体/系统了。

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问LC3 WB 条带不稳定

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问WB中药低中高剂量设置

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问为什么我小鼠的DNA条带一直跑不出来呀

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问之前诱导表达出来过的蛋白近一个月突然表达不出来了，什么原因？

dxy_f2af9zme

可以做个菌液 PCR 看下是不是质粒丢失了。

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问WB检测FLAG标签

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问在同一个转化平板挑取的大肠杆菌BL21(DE3),有的会在诱导时出现菌量异常增多的情况，为什么呢？

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问就是和好吧好改变发现吧

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问求问在WB实验中，蛋白分子量有57kDa，73kDa，42kDa，25kDa,13kDa，转膜时各分子量蛋白时间如何控制？

dxy_f2af9zme

我们直接整张膜一起转，都没切胶 200mA + 90 min，不需要考虑太多

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问这是一个问题这是一个问题？

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问如何用阳離子交換柱分離氨基酸混合物

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问信号强度为2000RFU，这个样品的大概浓度怎么计算

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问提取的细胞膜想包在大肠杆菌上，通过挤出机后发现有很多菌没包上膜，大家有什么好办法吗

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