如何验证miRna结合位点是在CDS区的？

可以通过特异性cds序列进行结合位点验证

可以用特异性cds区的引物连接上发光引物进行验证，产生特异性荧光就证明结合位点在cds区

验证miRNA与靶基因CDS区结合位点的方法可以参考以下几点:

1. 如果仅验证miRNA与CDS区结合,可以将CDS区含目标位点的序列克隆到萤火虫素酶报告基因的3'UTR区,这种设计是可行的。

2. 更精确的方法是保留 CDS区在转录本中的位置,将CDS区target序列表达克隆到exon及intron区,萤火虫素酶基因作为独立的exon插入。

3. 也可以直接将整个靶基因CDS区连同上下游exon-intron序列克隆表达,保证目标位点位置和结构不变。

4. 除报告基因荧光检测外,也可以进行突变实验验证目标位点,如点突变、删除等。

5. 还需要进行miRNA过表达或抑制来验证miRNA的调控作用。

6. 最后可以进行Western blot检测靶基因蛋白水平变化,以进一步支持结论。

综上,验证CDS区位点需要保证目标序列在转录水平的位置和结构不变,荧光报告实验结合其他验证方法,可以得出较可靠的结果。