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        实时荧光定量PCR扩增曲线平台期上扬是为什么?

        相关实验:单分子 PCR

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        dxy_rxbhbif8

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        2 个回答

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        loveliufudan

        有帮助

        实时荧光定量PCR扩增曲线平台期上扬可能由以下几个原因引起:

        PCR反应物质不足:如果PCR反应体系中模板DNA、引物、探针或dNTP等的浓度不足,会导致PCR反应速率降低,扩增曲线出现平台期上扬现象。

        初始DNA浓度过高:在PCR反应开始时,如果DNA模板的浓度过高,可能会在早期扩增时产生大量产物,导致引物和其他反应物质过早耗尽,使得PCR扩增速率降低,从而形成平台期上扬。

        PCR反应物质质量差:如果PCR反应物质的质量存在问题,例如引物或探针的污染或降解,dNTP的失活或者PCR反应体系存在抑制因子等,都可能导致PCR扩增速率下降,出现平台期上扬现象。

        扩增产物聚合物形成:在扩增反应早期,如果扩增产物出现聚合物形成,会导致PCR反应速率降低,从而产生平台期上扬现象。

        要解决这个问题,可以检查PCR反应体系的配制是否正确,优化反应条件,增加反应物的浓度等方法来尝试消除这些可能引起平台期上扬的原因。同时,可以对产物进行检测和验证,以确认是否为特异性产物,并检查扩增反应的灵敏度和特异性。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑是有引物二聚体或者非特异扩增。

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