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        PCR怎么防止水中出现条带?

        相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

        user-title

        1999时光

        连做两天的PCR只有第一天水中没有带,第二天上午换了新的水,台面喷酒精水中还是有带,下午室内通风,台面喷酒精,所有的引物水和Taq酶都换新的,水中还是出现了条带,为什么会这样呢?怎样才能避免水中出现条带呢?

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        3 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        体系更换一次吧,目前考虑还是体系内存在污染,酒精不足以清除污染物。

        user-title

        sswei

        有帮助

        PCR出现多条带(杂带)原因及措施:

        1) 引物用量偏大,引物的特异性不高。 应调换引物或降低引物的使用量。

        2) 循环的次数过多。 适当增加模板的量,减少循环次数。

        3) 酶的用量偏高或酶的质量不好。应降低酶量或调换另一来源的酶。

        4) 退火温度偏低,退火及延伸时间偏长。 应提高退火温度,减少变性与延伸时间,也可采用二种温度的PCR扩增。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。

        5) 样品处理不当。

        6) Mg2+浓度偏高。 因适当调整Mg2+使用浓度。

        7) 若为PCR试剂盒。也可能时试剂盒本身质量有问题。

        8) 复制提前终止。使用非热启动的聚合酶时常有发生。冰上准备反应体系或采用热启动聚合酶。

        9) 反应缓冲液未融化或未充分混匀。确保反应缓冲液完全融化并充分混匀。

        10) 引物特异性差。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

        11) 引物量过多。减少反应体系中引物的用量。

        12) 模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng,而基因组DNA则应<200ng。

        13) 外源DNA污染。 确保操作的洁净。

        user-title

        juyue2010

        有帮助

        使用带滤芯的枪头,防止气溶胶污染

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