qPCR引物二聚体怎么解决？NTC对照扩增出曲线怎么解决？引物冻融多次会影响其特异性吗？为什么我们放-20的引物冻融一次，再做？

减少引物浓度、调整Mix中镁离子用量、优化循环条件（采用两步法）降低引物二聚体的影响。NTC扩增出曲线可能是操作过程中或操作环境出现了污染，保证操作无误，清洁环境即可。引物多次冻融会影响浓度，不影响特异性。

减少引物的使用量，建议把加入引物的量减少一半试试，一般PCR体系里引物是过量的，减少引物的量对PCR反应影响不大，但是能一定程度上降低引物二聚体，毕竟引物少了，两对引物间两两结合的概率也就低了。

最根本的解决方法就是重新设计引物。从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法。 检查Taq酶，引物，Mg2+的浓度，如果浓度过高，可降低它们的浓度。检查模板。可能模板有问题，模板浓度过小，适当加大模板量

NTC对照扩增出曲线，可能是引物二聚体导致，可以进一步优化引物，也可能是反应体系污染，可逐步排除污染源。

引物冻融多次会影响其特性。

提高退火温度，降低引物浓度，降低镁离子浓度，或重新设计引物。

引物分装，尽量避免反复冻融。