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        求教RT-PCR

        丁香园论坛

        1176
        我做大鼠肝组织TNFalpha受体的表达,用退火温度52,40个循环都做不出,为什么?它的表达量应该很丰富的呀,会不会RNA降解了,但内参跑出来了(240bp),是不是我从文献上查的引物有问题,请高手帮验证一下;
        TNFR1 NM_013091
        1 ttttctccga gttttctgaa ctctggctca tgatcgggct tactggatac gagaatcctg
        61 gaggaccgta ccctgatttc catctacctc tgactttgag cctttctaac ccggggctca
        121 cgctgccaac acccgggcca cctggtccga tcgtcttact tcattcacca gcgttgccaa
        181 ttgctgccct gtccccagcc ccaatggggg agtgagagag gccactgccg gccggacatg
        241 ggtctcccca tcgtgcctgg cctgctgctg tcactggtgc tcctggctct gctgatgggg
        301 atacacccat caggggtcac cggactggtt ccttctcttg gtgaccggga gaagagggat
        361 aatttgtgtc cccagggaaa gtatgcccat ccaaagaata attccatctg ctgcaccaag
        421 tgccacaaag gaacctactt ggtgagtgac tgtccaagcc cagggcagga aacagtctgc
        481 gaggtgtgtg ataaaggcac ctttacagct tcgcagaacc acgtcagaca gtgtctcagt
        541 tgcaagacat gtcggaaaga aatgttccag gtggagattt ctccttgcaa agctgacatg
        601 gacaccgtgt gtggctgcaa gaagaaccaa ttccagcgct acctgagtga gacgcatttc
        661 cagtgtgtgg actgcagccc ctgcttcaat ggcaccgtga caatcccctg taaggagaaa
        721 cagaacaccg tgtgtaactg ccacgcagga ttctttctaa gcggaaatga gtgcacccct
        781 tgcagccact gcaagaaaaa tcaggaatgt atgaagctgt gcctacctcc agttgcaaat
        841 gtcacaaacc cccaggactc aggtactgcc gtgctgttgc ctctggttat cttcctaggt
        901 ctttgccttt tattctttat ctgcatcagt ctactgtgcc gatatcccca gtggaggccc
        961 agggtctact ccatcatttg tagggattca gctcctgtca aagaggtgga gggtgaagga
        1021 attgttacta agcccctaac tccagcctct atcccagcct tcagccccaa ccccggcttc
        1081 aaccccactc tgggcttcag caccacccca cgcttcagtc atcctgtctc cagtaccccc
        1141 atcagccccg tcttcggtcc tagtaactgg cacaacttcg tgccacctgt aagagaggtg
        1201 gtcccaaccc agggtgctga ccctctcctc tacggatccc tcaaccctgt gccaatcccc
        1261 gcccctgttc ggaaatggga agacgtcgtc gcggcccagc cacaacggct tgacactgca
        1321 gaccctgcga tgctgtatgc tgtggtggat ggcgtgcctc cgacacgctg gaaggagttc
        1381 atgcggctcc tggggctgag cgagcacgag atcgagcggc tggagctgca gaacgggcgt
        1441 tgcctccgcg aggctcatta cagcatgctg gaagcctggc ggcgccgcac accgcgacac
        1501 gaggccacgc tggacgtagt gggccgcgtg ctttgcgaca tgaacctgcg tggctgcctg
        1561 gagaacatcc gcgagactct agaaagccct gcccactcgt ccacgaccca cctcccgcga
        1621 taaggccaca cccccacctc aggaacggga ctcgaaggac catcctgcta gatgccctgc
        1681 ttccctgtga acctcctctt tggtcctcta gggggcaggc tcgatctggc aggctcgatc
        1741 tggcagccac ttccttggtg ctaccgactt ggtgtacata gcttttccca gctgccgagg
        1801 acagcctgtg ccagccactt gtgcatggca gggaagtgtg ccatctgctc ccagacagct
        1861 gagggtgcca aaagccagga gaggtgattg tggagaaaaa gcacaatcta tctgataccc
        1921 acttgggatg caaggaccca aacaaagctt ctcagggcct cctcagttga tttctgggcc
        1981 cttttcacag tagataaaac agtctttgta ttgattatat cacactaatg gatgaacggt
        2041 tgaactccct aaggtagggg caagcacaga acagtggggt ctccagctgg agcccccgac
        2101 tcttgtaaat acactaaaaa tctaaaagtg
        引物: F 5’-TCTCAGTTGCAAGACATGTCG-3’
        R 5’-TTGTGCCAGTTACTAGGACCG-3’(632bp)
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