同源重组构建质粒求助
dxy_btpk2zd7
我的基因pcr之后切胶送测序结果准确，用同样的模版再pcr胶回收后连载体，测序结果就错误，想求助一下各位大佬，可能会是什么原因
5 个回答
天一湖医者
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回收完跑胶测浓度了吗 ，错误一般是亮度太低浓度太低。
Eason老歌迷
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同源重组克隆技术在进行TA克隆构建重组质粒时，需要考虑外源片段上是否有需要用到的酶切位点，如果有的话，则在后续进行双酶切时会对片段进行酶切，因此无法正确的构建重组质粒。而同源重组克隆技术进行构建质粒时，是不需要对片段进行酶切的，因此无需考虑片段上的酶切位点。
bamboopiggy
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你错误的是位点，还是连条带都没有？如果错误的是位点，可能是出现了点突变，再做一次试试。如果是连条带都没有，可能就是你没有同源重组上去
汤姆卜丽波
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有可能是扩增过程中出现了重组突变，或者操作中出现了污染
balalaLy
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目的基因与载体没有连成功，或者连进去之后出现了移码
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