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        RT-PCR结果中出现undetermined

        相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

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        洛噜啦噜啦嘞

        我最近在做RT-PCR,总是有固定的孔出现undetermined,这是什么原因呢?

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        3 个回答

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        是不是加样问题,惯性操作,加到那个孔样品不够了

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        bamboopiggy

        有帮助

        undetermined 就是你孔里的模板量太低,没法detect到,可能你这个孔没有加模板,或者是模板混的不匀,加的少了。

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        未来9

        有帮助

        undetermined表示未知,意思为在一定的阈值下, 没有出现Ct值。看你的log扩增曲线,目的基因好像没有扩增啊?另外问一下你设计的引物的Tm值是多少?溶解曲线70℃差不多接近产物的Tm值了。建议检查一下引物是否有非特异结合的情况。
        你可以将你的结果先重分析一下,看看那些没有出现的孔,一般情况下这种是你的cDNA浓度低或者是这个引物的问题,看你上传的溶解曲线的那个图,建议你先检测一下你的引物是非特异性结合,再看一下你模板的浓度

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