4 个回答
dxywode
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先做普通PCR，电泳检测，看看目的条带好不好，好的话，再做qPCR，普通PCR做好了，qPCR的结果自然好。
bamboopiggy
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如果目的基因有结果，而内参没有结果，高度怀疑你mix里面少加了一条引物。
天一湖医者
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1.
循环数不够(一般不超过45循环,不仅背景值提高,定量也不准);
2.
PCR程序设置错误,检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集,TaqMan法则一般在退火结束时或延伸时采集信号,另外荧光采集是否选中;
3.
引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测引物和探针是否降解;
4.
模板量可能降解或上样量不足(不超过500ng,根据试剂盒说明书即可),对未知浓度的样本应从系列稀释样本的最高浓度做起;如果发生模板降解,
未来9
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内参都不出值，那就可能是引物、buffer等东西出了问题，看看自己是不是漏加了什么
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