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问
利用加尾法 real-time PCR 方法检测 miRNA,PCR 上游引物设计有什么诀窍和原则吗?
phhcrab
1.不太明白你说的第一种方法,是直接miRNA反转录吗,cDNA跟miRNA一样长吗?因为miRNA片段非常小,PCR检测会比较困难。2.你说的第二个方法可能就是环状引物法,就是反转录的引物带有一个环状结构的,反转录后,环状结构会打开,就相当于是把原来的片段延长了,这样后续PCR就好做了,用SYBR Green或者探针检测都可以。现在这个方法用得很多,很多做miRNA检测服务的公司用的也是这种方
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问
同一特异不同退火温度的 PCR ,如何确定最佳温度?
王二狗爱科研
温度越高则条带越暗,再高就没条带,我做过
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问
PCR有产物但是电泳无结果是为什么?
alaling
1,marker和引物有条带,说明在跑胶的环节应该没什么问题 2.内参和目的条带均没有,说明很大可能是在跑PCR的环节出现问题,就是没有P出东西。应该在PCR的环节找问题 3.你说电泳无目的片段的条带,是指有其它非特异条带还是根本就没有条带?如果可以,放上图是最好的,大家都可以一目了然,比这里做排除法强的多
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