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        病毒纯化

        相关实验:痘苗病毒纯化实验

        user-title

        小吕口口

        有人做过杆状病毒纯化吗,能给下具体的操作步骤吗,在下感激不尽

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        2 个回答

        user-title

        dxyc42u

        有帮助

        建议去已发表论文中看看,比如这篇图片描述

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        杆状病毒纯化步骤:

        1. 制备病毒上清的系列稀释液,该病毒上清获得自在无血清完全培养液中转染 pAC360 β-gal DNA的细胞。在含150 ug/ml X-gal 的琼脂糖顶层覆盖物下病毒形成蚀斑。

        2. 当蚀斑形成后,用灭菌巴斯德吸管挑取一个分离较好的蓝色蚀斑,并将琼脂糖块移入 一支含有1 ml 无血清完全培养液的无菌试管中。在旋涡混合器上剧烈篱荡,并用无血清完全培养液制备10-1、10-2和10-3的系列稀释液。

        3. 用含150 ug/ml X-gal 的琼脂糖顶层覆盖物蚀斑测定病毒(有助于发现重组子),重复蚀斑试验,直到获得纯的重组病毒贮液。

        4. 用无菌吸管挑取一个纯的重组蚀斑,将琼脂糖块移入一含2.5x106 Sf9细胞和5 ml 完全培养液(含10%胎牛血清)的25 cm2 培养瓶中。于27℃温育4~5天直到大多数细胞被感染。

        5. 确定病毒滴度(应在5x107~1x108 pfu/ml之间)。

        6. 加入1 ml 该毒种贮液于一支1.5 ml 螺口冻存管中,于-80℃可长期保存,于4℃保存剩余的液体(标记为初代毒种液)。从初代毒种液中生产大批病毒贮液并滴定之。
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