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        体外转录,模版DNA必须是双链吗,单链DNA可以作为模版吗?

        相关实验:体外转录合成单链 RNA 探针

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        dxy_z1kje177

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        3 个回答

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        bamboopiggy

        有帮助

        单链DNA可以作为模板,但是起始必须是双链。

        DNA模板必须包含噬菌体聚合酶结合并开始RNA合成所需的双链启动子区域。转录模板包括经克隆构建的质粒、基于RNA前体进行第一链及第二链合成(例如aRNA扩增)得到的cDNA模板,以及通过PCR方法或对化学合成的寡核苷酸进行退火所得到的线性模板等。

        在设计转录模板时,必须确定需要的是正义链还是反义链转录本。若RNA是要用作与信使RNA杂交的探针(例如:Northern blot、原位杂交、核酸酶保护实验等),则需要互补的反义链转录本。反之,当进行表达、结构或功能研究时,或使用人工正义链RNA来构建RNA定量的标准曲线时,则需要正义链转录本。

        DNA模板上的RNA聚合酶启动子序列+1 G是转录产物中的第一个碱基。为了获得正义RNA,编码链的5’末端应当与启动子的+1 G相连,或正好处于下游。若要转录反义RNA,则是非编码链的5’末端应当与+1 G相连。若插入片段是在载体中,则应当在启动子和需转录插入序列的下游对载体进行线性化

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        天一湖医者

        有帮助

        DNA的两条链不能同时作为转录的模板链。因为DNA双链中只有一条链有转录功能,而另一条链是它的互补碱基,不能做起点。

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        未来9

        有帮助

        转录时是以DNA的一条模板,能转录出起始密码子的那一条模板

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