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问
感受态制备不出来是为什么?
detaibio
做大肠杆菌蛋白表达试验中,感受态的制备主要与以下几个因素有关:1.细菌的生长状态:实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞(一般通过检测OD600来控制。DH5α菌株 OD600为 0.5 时细胞密度是 5 × 107/ml );2.所有操作均应在无菌条件和冰上进行;3.经 CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加, 24小时达到最高,之后转化
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问
自杀质粒构建的重组质粒转化含有自杀质粒的大肠杆菌,是否会有质粒的相容性问题?
大明天桃子
没有必要再转到含有自杀质粒的细菌中了。你构建的含有同源片段的重组质粒本来就具有自杀质粒的功能,转到没有自杀载体的细菌中,其同样能够进行敲除或失活目的基因。另外,如果你有其他特殊目的,实在要转到含有自杀载体的细菌里的话,那你可在你重建的质粒上添加一个不同的抗性基因,这样就可以通过添加抗生素防止质粒丢失了。还有质粒的不相容性是一个缓慢的过程,一般需要几代或几十代或更长的细菌繁殖周期,你做自杀载体的话肯
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问
求问大肠组织标本保存条件及方法?
emily_cby
是否需要加rna保护液
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问
质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳检测,琼脂糖凝胶电泳的目的是什么?
我是金博士
针对质粒DNA提取实验,它用来检测DNA是否成功提取。除此之外,还可以用来DNA纯化、验证PCR产物、酶切产物等等。建议先复习下基本知识,这个问题实在太基础了。
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问
PCR 电泳验证条带很亮,但酶切后跑电泳后条带很暗很模糊,该怎么改善?
我是金博士
酶切量多少?可以扩大酶切的PCR量试试。
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问
质粒怎么都提不出来,该用哪种方法?
琴琴小贝
分支杆菌中的质粒提取:采用经典的碱裂解法。取4.5 mlEP管一支,加0.5 ml菌液,加入1 ml溶液1(15%蔗糖、25 mMTriscl pH8.0、10 mMEDTA pH8.0),隔时加入溶菌酶,终浓度10 mg/ml,小心混匀。置于0度冰浴30 min,加入2 ml溶菌液2(0.2NNao 1%SDS),0度冰浴10 min,加1.5 ml 3M NaAC小心混匀。1 000 rpm离
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问
实验欲获得某一确定的质粒,请问接下来该如何做?
我是金博士
个人觉得实验目的是要获得质粒,那么将产品洗脱之后,还有电泳跑胶,然后切胶之后纯化,再转化到相应菌种里面去。
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问
双酶切引物电泳出现两条带是为什么?
dxy_pwq4k4o3
大的一条是载体
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问
磁珠法提取DNA实验中磁珠的使用技巧有什么?
markbrianxy
一般7-10ul 差不多!需要配合磁力架清洗比较方便!
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问
大肠杆菌转化子有大有小,结果诡异,有何原因?
我是金博士
这情况我遇到过,尤其菌液PCR时候,有的强有的弱,有的带大小还不一样。我没有具体研究过啥愿意,但把大小一样的那个送去测序,一般都是正确的。关于你的这个情况,我分析【我自己的我也分析过】1、可能酶产物碎了一些,这样连进去就有大有小。如果你引物用的是在载体上的,那很可能扩出大小不同的。如果你引物就是在基因上的,这个好解决,你把退火温度逐渐提高,看看是不是那个不同片段就没了。2、有的时候发生了片段自连【
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问
在生物学实验中,Panels 具体是指的什么?
great0722
panel是把感兴趣的基因放在一起,通过检测这些基因,来了解某种疾病的基因变异情况。与一代测序,PCR等技术相比,panel一次检测的基因数目非常多,通量高,价格便宜。panel测序的实现,是把感兴趣的基因用探针捕获下来,然后进行高通量测序,并进行数据的分析和解读。
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问
关于 EMSA 探针的选取,该使用已商品化的还是分别设计合成?
丁香通采购助手
可以先咨询一下探针供应商,如果不可行的话,那样也可以请公司合成探针,计算下成本,在去顶方案吧,化学发光EMSA试剂,现在商品话的试剂盒也比较成熟了了,点击看看化学发光EMSA试剂盒
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问
请问50xPIC是什么呀?
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问
酶切之后就可以直接电泳了吗?
我是金博士
1、酶切时间太长 2、为啥是用上样buffer终止?应该没法终止,估计都切没了 3、纯化产物之前没跑胶吗? 4、跑胶之前要染色的
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问
如果出现非特异性带,可能有哪些原因?
我是金博士
可能的原因有:1、引物设计不合理,出现发夹结构或二聚体;2、退火温度不合适;3、聚合酶质量不好;4、有污染;5、引物不纯或过量;6、模板过量。
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问
酶切没有条带,怎么办
我是金博士
PCR产物有条带吗?酶切时间有可能太长了,可以试着短点。
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问
不是自己的构建的菌种如何进行质粒扩增?
我是金博士
不清楚你的是啥单位,这种情况我遇到过,当时问别人要的pET22b,给的不是放在菌种里的,因此只能转化到菌株里,获得重组菌,再摇菌,提质粒。另外要注意,你的量少,感受态一定要好,操作要非常小心。一般转个现成质粒,还是比较轻松实现的。祝你好运。
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问
求指教 PCR 技术与 DNA 序列分析在生物物种保护中的作用?
丁香通官方号
PCR技术应用:研究:基因克隆;DNA测序;分析突变;基因重组与融合;鉴定与调控蛋白质结 合DNA序列;转座子插入位点的绘图;检测基因的修饰;合成基因的构建;构建克隆 或表达载体;检测某基因的内切酶多态性。诊断:细菌(螺旋体、支原体、衣原体、分支杆菌、立克次氏体、白喉杆菌、致 病大肠杆菌、痢疾杆菌、嗜水气单胞菌和艰难梭菌等);病毒(HTLV、HIV、HBV、 HPVS、EV、CMV、EBV、HSV
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问
经酶切后的线性 DNA 可以直接进行转化么?
我是金博士
要酶连过呢,先连接到载体上。不过你可以试试。
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问
质粒检测有多个条带
我是金博士
环状应该是单条带,可以用酶切,那就是多条带了,根据分子量大小来判断。
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