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核算斑点杂交,显色问题
天一湖医者
应少量屡次点样,防止样品外渗,不利于观察显色.将杂交膜封入杂交袋中,参加杂交液,应尽量除去气泡再封口.防止杂交不完全,显色不明显.
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问
Fish实验探针设计问题?
kkkinorrr
请问您现在知道怎么设计探针了吗?
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问
请问植物原生质体制备和培养过程中维持细胞渗透压的除了甘露醇还可以用什么物质?
bamboopiggy
山梨糖醇和海藻糖也可以,但是看文献,还是用甘露醇的多。
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问
如何确定原核表达出来的蛋白质是我想要的蛋白呢?
bamboopiggy
用你目的蛋白的抗体,跑个wb不就可以了吗?
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问
核酸斑点杂交,杂交袋的使用
bamboopiggy
去某宝买个封口机就可以啊,封口机是标配
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问
核酸斑点杂交中杂交液中探针的浓度多少合适
bamboopiggy
这个要看你具体用什么探针,买的时候,公司应该都有推荐浓度,一般0.5uM
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问
酶切反应混合物的体积是否对酶切效果有影响?为什么?
府宅
有影响,加入反应的酶体积不超过反应总体积的1/10,避免限制酶活性受到甘油的影响。大多数限制酶贮存在50%甘油溶液中,以避免在-20℃条件下结冰。
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问
双酶切产物OD值过高可能是什么原因?
bamboopiggy
胶回收的260,280没法看的,只是能给你提供参考浓度,算你的插入片段和backbone的比例。
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问
双酶切怎么也没切完全,有假阳性怎么办?
bamboopiggy
你先看看你的酶切的接口会不会自连,然后可以做单酶切的对照,是否都可以同时切成线性。
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问
关于核酸斑点显色,我的膜有点小就只有undefined5
bamboopiggy
显色反应可以放皿里,也可以放杂交袋里。膜小,可以放小点的盒里,如果想扩大体积,也可以的。
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问
杂交显色的问题,我还有好多问题🙊
bamboopiggy
显色反应可以放皿里,也可以放杂交袋里。膜小,可以放小点的盒里,如果想扩大体积,也可以的。
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问
pTRK669质粒电转进入嗜酸乳杆菌
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问
预杂交液的洗膜 65摄氏度洗膜是怎么操作呢
bamboopiggy
你问的是在65度,怎么洗膜吧?你可以把预杂交液预热到65度,然后放入膜,想65度洗,可以讲带温度的摇床调到65度,也可以把普通摇床,塞到65度的孵箱里,办法总比困难多
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问
核酸斑点杂交,预杂交液和杂交液的制备
bamboopiggy
预杂交液和杂交液在灭过菌的试管里制备就可以。杂交液和预杂交液的区别就是一个加的探针,一个加的鲑鱼精DNA来封闭非特异性的吸附点。预杂交液实际上就是不含探针的杂交液,。用于制备杂交液的预杂交液需要加鲑鱼精DNA,也可以用牛血清。杂交液每100平方厘米 60ul够了,因为预杂交液不可能100%的倒出来,还是有点的。
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问
嗜酸乳杆菌电转条件及质粒体外修饰
府宅
可能培养基或者是复苏液洗涤液用的水不行,电荷较多。可以用哇哈哈的纯净水。我用的是PEG1500作为洗涤液,洗3-5次就可以了。
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问
在ncbi上搜索基因序列,为什么给出的氨基酸注释与密码子表不一致呢 例如∶GAA ncbi上给出的是F,对应密码子表GAA应为E
bamboopiggy
你给的那个图太小了,我看不清楚,但是你考虑没有考虑过GAA的相对应的反向链是UUC呢?uuc正好就是F。
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问
关于核酸斑点杂交的问题
bamboopiggy
不用要求那么严格,和胶接触的面为正面,你记住你铅笔标在哪一面就好,没有那么严格的反正面。
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问
做wb半定量为什么内参总是调不一致
未来9
一:如果单独上样可以出现,可以排除蛋白本身的问题,但混合一起加时却跑的不齐,最大的可能就是胶的问题,胶配的不均匀导致蛋白跑的不在同一水平。二:就是抗体孵育问题,不知你是用孵育盒,还是用封膜孵育,一定要保证膜与抗体充分接触,保证孵育效果。三是显影剂是预混还是混合好的,注意混合比例
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问
哪个牌子的雌激素受体拮抗剂好用啊?
bamboopiggy
AZD9496,应该是阿斯利康产的,有个叫百奥莱博的公司卖
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问
做southern时为什么用酶切产物来跑胶,而不是直接用基因组DNA跑胶呢
bamboopiggy
因为基因组DNA,需要将其切割成大小不同的片段,才能进行杂交,一般用限制性内切酶来切。
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