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关于RIP求助
Eason老歌迷
是不是你的实验步骤有问题。细胞核分离和裂解物沉淀为避免污染,使用不含 RNA 酶的试剂。染色质剪切应该在液氮中冷冻一份裂解物用于对照 RNA 分离。根据所关注的蛋白质和抗体,加入的抗体量和孵育时间可能需要进行优化处理。
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问
凝胶电泳结果如图所示该怎么办
Eason老歌迷
你这是有点亮带拖尾。可能是你的引物设计不佳,也可能是PCR中DNA浓度加的太多,也可能是mg2+浓度加的太高。
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问
RNA提取液(25:24:1,PH<5.0)的提取效果及使用方法
Eason老歌迷
rna提取液的提取效果很好,具体使用方法和trizol法差不多。苯酚使蛋白质变性,同时抑制了RNase的降解作用。氯仿抽提加速有机相与液相分层,去除核由于苯酚与水有一定比例的互溶,所以如果使用非饱和酚,样品中的水分会进入酚相,样品会丢失。同时水相中也会有少量的酚,这些残留的酚会抑制后续酶反应。而饱和酚就没有丢失样品的缺点,因为它已经提前充分吸足了水分(饱和酚中含10%左右的水分),因此不会丢失样品
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问
RNA提取后跑电泳发现加样孔发亮是有蛋白污染吗?该如何解决,已少取上清
bamboopiggy
蛋白污染,你加氯仿以后,吸上清的时候,就吸400ul,足够提rna了,这样接触不到那个蛋白质的小白片。
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问
【求助】电镜大组织块固定太久
bamboopiggy
能切,但是最好用靠近戊二醛的外层的,怕内层的渗透不好
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问
小鼠离体心脏灌流
bamboopiggy
你的实验目的是什么呢?根据你的实验目的来决定什么时间加CaCl2
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问
木瓜蛋白酶-sevag法怎么除多糖蛋白啊
Eason老歌迷
可以试一下阳离子交换柱色谱除蛋白。
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问
求助重组蛋白的酶活性测定问题
天一湖医者
如果你有正确构想的有活性的高纯度酶,可以将你重组表达的酶和有活性的酶做个CD 看它们的高级结构是否一致!如果没有有活性的酶,很难知道你表达的酶的构想是否正确,即便是知道他的AA序列。一般的高级结构预测软件是在已知AA序列的情况下预测它可能的三级结构,与该实际的存在形式没有直接联系
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问
求FOXO3a过表达质粒
Eason老歌迷
具体可以参看这篇文章,我觉得它讲的很清楚。这是一篇2014年发表在生物技术通讯上的文章。
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问
酵母蛋白诱导问题
Eason老歌迷
我们都是通过实验或者结合文献来探索出最佳区间。温度常温或者28℃。ph6.0—6.8等等。
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问
核酸电泳环状PCR产物两条带
Miracle星
应该是片段降解了或者这个估计是引物带,PCR反应的时,退火温度,引物系列等都会造成引物带,还有可能是非特异性产物
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问
重组阴性对照长了很多菌?
Miracle星
重新再做一次,会不会是环境因素:做过三个地点的排查,一是常做实验的实验室,二是通风好的地方,三是超净台
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问
LAMP扩增假阳性问题
Eason老歌迷
LAMP 扩增技术灵敏度高,一旦开盖就容易形成气溶胶污染,目前国内大多数实验室不能严格分区,假阳性问题比较严重。大量研究推荐使用浊度计等不开盖方法检测扩增产物。
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问
qpcr如果目的没有差异,会是引物的问题吗?
Eason老歌迷
才半个多月,不可能会失活的,除非你们实验室停电了…… PCR引物要在-20℃或-70℃保存,要避免反复冻融造成DNA降解。我觉得你跑不出差异,可能是差异不是特别明显
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问
DNA合成中BrdU的掺入
Eason老歌迷
可以的,它也是属于原料的一种,
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问
CRISPR CAS9质粒 T7E1 sanger sequencing TAcloning
bamboopiggy
你可以直接梯度稀释,铺96孔板,挑单克隆。然后得到目的细胞。 只要有knock out T7E1 就能切出条带。你这么混着,送测序,绝对是套峰
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问
在第2向电泳中,为什么我的溴酚蓝条带都跑到玻璃板下缘了,而蛋白质只跑了一半啊?
Bnight
1、电泳缓冲液的问题:换用新鲜的电泳缓冲液2、分离胶内浓度不均:灌胶的时候胶要混匀3、分离胶凝固不均一:如玻板没洗净,玻板在灌胶前用吹风吹干时没冷却就灌胶
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问
抗体纯化求助
红格子一号
你首先要确定纯化之后是不是有蛋白质,看丽春红或者sds page,没有条带也有可能是纯化出问题了呀
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问
求助!有人知道这种能分离单个碱基的电泳是怎么跑的吗
yanlai000
RFLP把,限制性内切酶片段长度多态性
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问
求助/fluo-8am染料会淬灭吗?
Eason老歌迷
会。光照射是致荧光淬灭的最常见原因,光照射也会促进激发态分子与其他分子相互作用而引起碰撞,使荧光淬灭。溶剂种类、pH值及温度等环境条件的不同也会让淬灭发生。
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