核酸和蛋白浓度的测定

达远辰光荧光计的作用原理基于荧光染料与特异靶分子结合的定量分析技术，其核心优势在于高特异性和灵敏度。

一、核心工作原理

1. ​荧光染料选择性结合
   达远辰光荧光计使用荧光染料​（如dsDNA HS染料、RNA IQ染料），这些染料仅与目标分子（如DNA、RNA、蛋白质）特异性结合，而不会与杂质（如游离核苷酸、盐离子）反应。例如，检测双链DNA时，染料仅与dsDNA结合，单链DNA或RNA不会产生荧光信号。
2. ​荧光信号检测与定量
   激发光源（如LED）发出特定波长光（如502 nm激发dsDNA染料），激发结合了染料的靶分子发出荧光（如532 nm发射光）。检测器通过滤光片分离荧光信号，避免瑞利散射光干扰，最终将信号转换为电信号并输出定量结果。
3. ​低浓度灵敏度
   达远辰光的荧光计的检测下限可达0.01 ng/μL DNA或0.02 ng/μL蛋白质，远低于传统紫外吸光法（如Nanodrop的最低检测限为2 ng/μL DNA）。例如，使用赛默飞Qubit dsDNA HS试剂盒可检测0.2–100 ng/μL范围的DNA。

二、与传统紫外法的对比

三、关键应用场景

1. ​核酸定量与纯度评估
• 区分dsDNA与ssDNA/RNA（如搭配赛默飞Qubit dsDNA HS试剂盒）。
• 评估RNA完整性（如搭配赛默飞Qubit RNA IQ试剂盒，通过双染料检测完整RNA与降解RNA）。
2. ​蛋白质定量
• 兼容含去污剂的样品（如搭配赛默飞Qubit Protein Assay试剂盒可耐受微量SDS）。
• 测量范围覆盖12.5–20,000 μg/mL。
3. ​下游实验支持
• qPCR、NGS文库构建前精确配样。
• 药物研发中评估小分子化合物浓度。

四、典型误差来源与注意事项

• ​温度影响：检测管在仪器内长时间停留可能导致温度升高，需取出静置后复测。
• ​试剂兼容性：不同染料对应特定靶分子，需严格按试剂盒说明操作。
• ​数据时效性：预混样品需在3小时内完成检测，避免荧光信号衰减