加尾法miRNA跑PCR，CT值始终大于30
火锅花花
miRNA+PCR新手小白在线求助：我用锐博家的加尾法miRNA跑PCR，无论用cDNA原液还是稀释3、5、10倍，CT值始终大于30，这是因为靶miRNA在细胞系中的表达量太低导致的吗？求大佬在线指导！这两张图是我用cDNA原液跑的相关数据，跪求大佬解惑。
3 个回答
土井挞克树
有帮助
是的，表达太低的话稀释多少倍区别不大
火锅花花
请问这可以确定是miRNA表达太低的问题吗？我现在miRNA和细胞系都没法更换了，如果确定是miRNA表达太低了，那还有什么方法可以跑出可以用的靶miRNA的PCR结果吗？我选择miRNA和细胞系时候参考的几篇SCI文献用这个细胞系跑出了这个靶miRNA的PCR了，他们为嘛能跑出来？😭 求大佬进一步指导一下我，谢谢大佬！
周末也要努力呀
有帮助
引物特异性也会影响CT大小，建议先blast引物确认一下
高山云初
有帮助
有可能是因为靶miRNA在细胞系中的表达量太低导致
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