6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)、苹果酸氢酶(MDH)用酶标仪测定的计算方法

使用96孔板测定的计算公式如下

1、血清（浆）6PGDH活力的计算:

单位的定义：每mL血清（浆）每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

6PGDH（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=2143.6×ΔA

2、组织、细菌或细胞中6PGDH活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

6PGDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=2143.6×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

6PGDH（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=2143.6×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

6PGDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(2000×V样÷V样总) ÷T=1.072×ΔA

V反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.05 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，3 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；2000：细菌或细胞总数，2000万。

(1)6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活力测定

6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活力测定方法根据文献略有改动6979。

测定反应体系(5ml)为：0.1mI浓度为1M的Tris-HCl缓冲液、0.1ml浓度为25mM的底物G-6-P溶液、0.1ml浓度为2mM的NADP+、0.1ml浓度为0. 2 M的氯化镁溶液及2.5ml ddH20，混合均匀后，在340 nm下测定吸光度值A0，作为空白值。再加入0.1 ml粗酶液，摇匀后，与25℃条件下保温，每30S于340 nm下测定吸光度值A，连续测定4 min。以A对时间作图，取反应最初线性部分计算△A值。根据公式计算酶活力。

酶活力单位(U)定义为：25℃条件下，每分钟G6PDH催化生成1μmol NADH的酶量为一个单位。式中：△A/min为340 nm处每分钟吸光度的变化值；V为酶促反应体积(mL)；为NADH的摩尔消光系数(6.22×103L／mol·cm-1)；b为比色皿光程(cm)。

(2)苹果酸酶(ME)活力测定

测定反应体系(3ml)为：0.5 mI浓度为0.4M的Tris-HCl缓冲液、0.1 ml浓度为30 mM的底物苹果酸溶液、0.2ml浓度为3.4 mM的NADP+、0.1ml浓度为0.12 M的氯化镁溶液及2 ml ddH20，混合均匀后，在340 nm下测定吸光度值A0，作为空白值。再加入0.1 ml粗酶液，摇匀后，与250C条件下保温，每30s于340 nm下测定吸光度值A，连续测定4 min。以A对时间作图，取反应最初线性部分计算△A值。根据公式2-1计算酶活力。

酶活力单位(U)定义为：25℃条件下，每分钟ME催化生成1μmol NADH的酶量为一个单位。

根据酶检测试剂盒的吸光度结果，和指导公式进行计算。