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        Gateway反应的引物是怎么设计的?需要加上attB这个没看懂

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        dxy_4uie5g8r


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        2 个回答

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        loveliufudan

        有帮助

        在Gateway克隆技术中,attB位点是重要的克隆元件,它位于载体和DNA片段之间,是介导DNA片段定向插入载体的关键元素。因此,在进行Gateway反应时,需要使用含有attB位点的引物,以引导目标DNA的定向克隆。通常情况下,引物设计可以遵循以下步骤:

        根据目标DNA片段的序列,选择包含attB位点序列的引物。这些引物通常被称为Gateway入口引物或attB引物。

        设计引物时需要考虑attB位点的序列和位置。attB位点有两种序列:attB1和attB2,它们位于目标DNA片段的两端。因此,需要设计两个引物,一个针对attB1位点,另一个针对attB2位点。

        引物的序列应该满足PCR引物设计的一般原则,如避免hairpin和dimer的形成、优化引物长度和温度等。

        需要注意的是,Gateway反应的引物中含有attB序列,但PCR扩增时不需要添加attB位点。通常情况下,attB序列会在PCR扩增过程中被引物所扩增。完成PCR扩增后,目标DNA片段已经包含attB位点,并可以直接进行Gateway克隆反应。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        用snapgene软件设计,按照步骤添加克隆基因就行

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