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        请问PCR在组织样中扩增出来条带出现了一千多的,但目的条带在两百左右,而且在细胞样中扩增没有出现一千的条带,可能是什么原因呢?

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        dxy_nntfa8i

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        2 个回答

        user-title

        此用户已注销

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        PCR反应扩增产物出现多条带原因:

        (1)引物用量偏大,引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。

        (2)循环的次数过多。适当增加模板的量,减少循环次数。

        (3)酶的用量偏高或酶的质量不好,应降低酶量或调换另一来源的酶。

        (4)退火温度偏低,退火及延伸时间偏长。应提高退火温度,减少变性与延伸时间,也可采用二种温度的PCR扩增。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。

        (5)样品处理不当。

        (6)Mg2+浓度偏高,因适当调整Mg2+使用浓度。

        (7)若为PCR试剂盒,也可能时试剂盒本身质量有问题。

        (8)复制提前终止。使用非热启动的聚合酶时常有发生。冰上准备反应体系或采用热启动聚合酶。

        (9)反应缓冲液未完全融化或未充分混匀。确保反应缓冲液融化完全并彻底混匀。

        (10)引物特异性差。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

        (11)引物量过多。减少反应体系中引物的用量。

        (12)模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng,而基因组DNA则应<200ng。

        (13)外源DNA污染。确保操作的洁净。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        那还啥考虑有污染,有其他核酸污染

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