实验问答22,027,215 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问蛋白组学的组织和细胞标本处理？

土井挞克树

蛋白组学一般选择强效裂解液，wb相对温和一些

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问Hela细胞为什么转染不进去啊？

loveliufudan

HeLa细胞转染不成功的原因可能有以下几点:1. Lipo2000与DNA的比例可能不适合HeLa细胞,可以试试调整这比例,增加Lipo2000量。2. 汇合时间可能需要延长到10-15分钟,以提高Liposome包裹DNA的效率。3. HeLa细胞状态可能不佳,需要用对数生长期的健康细胞。提前24小时换新培养基可以改善细胞状态。4. 转染液加入细胞中的方式可以优化,滴加转染复合物要轻缓,平铺于整

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问蛋白组学数据，为什么一个样品的3个重复，对于某一个蛋白，2个重复值很高，另1个却为缺失

晓雨知春来

有可能是样本本身存在实际的生物学变异。不同细胞亚群中该蛋白表达水平真的存在差异。

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问蛋白组学数据中，缺失值怎么补全？

此用户已注销

在处理这个问题上出现了一些填充缺失值比较准确地方法，如K个最近邻的缺失值填充法（KNN）、有序的K个最近邻填充法（SKNN）和奇异值分解法（SVD）。

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问蛋白组学数据，质谱自动分析后，还需要自己进一步标准化或归一化处理吗？

huarenqiang5

蛋白组学数据，质谱自动分析后，建议进一步标准化或归一化处理比较好。

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问蛋白组学数据，有哪些归一化方法？

此用户已注销

蛋白归一化的方法主要包括两种:内标法和总蛋白法

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问蛋白组分析，不同组数据仪器做了归一化分析，在做热图时，还需要再做一次让数据对称吗？

huarenqiang5

不同组数据仪器做了归一化分析，这时候做热图建议再做一次让数据对称。

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问蛋白质分离纯化的基本原则？

loveliufudan

蛋白质分离纯化的基本原则主要包括:1. 保持蛋白的生物活性:选择温和的缓冲系统,控制温度,加入稳定剂等,以保持蛋白的天然结构和活性。2. 渐进法纯化:通常需要多步骤分离,每一步移除一部分杂质,逐步提高目标蛋白纯度。3. 充分利用蛋白质的化学与物理性质差异进行分离:如大小、电荷、亲和特性等。4. 保持蛋白质溶解状态:控制pH、离子强度、去离子水溶液成分等关键因素。5. 避免蛋白质降解:加入抑制蛋白酶

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问小白真诚提问，由于实验室无超速离心机，想提取多聚核糖体，除了蔗糖离心法，还有其他方法吗？

loveliufudan

除了蔗糖密度梯度离心法外,我建议您可以试试以下几种方法:1. 不同浓度NaCl提取:利用不同浓度NaCl溶液裂解细胞,低浓度NaCl可以提取溶酶体,高浓度NaCl溶液可以获得粗提多聚核糖体。2. 离子交换层析:利用DEAE-Sepharose等离子交换基质,依据多聚核糖体和杂质的不同电荷特性进行分离,不依赖离心力。3. Mg2+沉淀:利用Mg2+可以特异聚集多聚核糖体的原理,在适宜浓度Mg2+条件

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问蛋白标记技术需要前期准备什么?

loveliufudan

做蛋白标记技术(如iTRAQ)来进行差异蛋白质组学分析,主要的前期准备工作包括:1. 实验设计:确定比较组别,每个组别需要的样本量,重复次数等。2. 样本收集和处理:收集质量好、含量充足的样本,快速冷冻保存。免疫沉淀或ultrafiltration去除高丰度蛋白。3. 蛋白提取试验:优化裂解液配方和裂解条件,确保蛋白充分裂解和溶解。4. 蛋白定量:优化Bradford或BCA蛋白定量方法,确定样品

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问如何利用蛋白组学筛选差异蛋白?

生化检验分析

蛋白质组学筛选差异蛋白就是差异蛋白组学研究的主要内容，差异蛋白组学就是在组学水平上研究不同状态或不同处理条件下表达水平存在显著差异的蛋白质，以研究生物体在不同条件下的反应机制，是研究和认识生命活动本质的一个有效途径。差异蛋白质组学在一定程度上揭示了生命活动变化的分子机理，在疾病的诊断、发生、病程和疗效监测上有着重要意义，也广泛应用于作物育种工程和基因工程产物鉴定等。液相色谱串联质谱技术是差异蛋白质

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问愈创木酚和过氧化氢需要多大浓度的溶液，各自要用什么溶质去稀释？

feixue7758527w

这两个都是可以用蒸馏水稀释的，具体稀释倍数要看具体实验，我实验时很多时候都不稀释的。

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问MPTP亚急性模型，多久会出现运动障碍呀？

dxy_mqg1dtg8

根据文献报道，使用MPTP亚急性模型，大多数动物在注射MPTP后的几天内就会出现运动障碍的症状。这些症状通常包括运动缓慢、震颤、僵硬等。在你的情况下，你目前使用的剂量是30mg/kg，每天打一次，打5天后进行转棒测试。然而，如果在第8天时没有观察到运动障碍的变化，可能有几种可能的原因：剂量不足：30mg/kg的剂量可能不足以诱导明显的运动障碍。你可以尝试增加剂量或延长药物处理时间来增加模型的有效性

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问为什么Val走的更远，疏水性不是Leu更强吗?

loveliufudan

的确,从理论上来说,亮氨酸(Leu)的疏水性应该比缬氨酸(Val)更强,因为Leu具有更长的烃基侧链。但是实际上,在标准的层析条件下,Val往往会比Leu迁移更远。这主要有以下两个原因:1. Val的分子量(117Da)比Leu(131Da)小,小分子量使其更容易在层析系统中迁移。2. Leu的烃基侧链是支链,空间构象较Val更复杂。在层析纸上,Leu的迁移可能会受到更大的阻力。所以在此题层析结果

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问在酶的定点突变研究中，某一特异的突变作用是导致酶活性消失，表明该突变残疾具有催化作用，为什么？

loveliufudan

在酶的定点突变研究中,如果某一特异的突变导致酶活性消失,则说明该突变残基很可能参与了酶的催化作用,原因如下:1. 酶催化反应的关键是酶活性中心。活性中心由催化作用的关键氨基酸残基组成。2. 如果突变导致这些关键氨基酸残基被改变,那么会直接破坏酶的空间结构,使催化作用部位无法正确形成。3. 从而使酶无法发挥催化作用,反应不能进行,所以酶活性会消失。4. 因此可以判断,该突变残基 participat

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问顺铂可以直接用于体外细胞的造模吗

医路顺风加油

顺铂作为化疗药物，可以直接用于体外细胞实验中。但需要注意以下几点：1.溶解和稳定性顺铂在水中稳定，不需激活。不稳定的报道主要是在某些有机溶剂如 DMSO 中的不稳定。体外实验可以用无菌 PBS 或水溶解。2.浓度范围细胞实验常用浓度范围5-50μ M ，最优浓度因细胞类型不同而异，需要进行预实验确定。太高浓度会导致细胞大量死亡。3．作用时间预处理细胞24-48小时常可见明显作用。需测试不同时间梯度

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问药代动力学参数的测定实验

huarenqiang5

药代动力学参数主要有如下几种:1）表观分布容积。2）血浆药物浓度。3）血药浓度-时间曲线。4）血浆药物峰度浓度。5）血浆药物浓度达峰时间。6）血浆生物半衰期。7）药-时曲线下面积（AUC）。8）生物利用度。9）血浆蛋白结合率。

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问尾静脉注射LPS过量，大鼠解剖特点有哪些，怎样确定大鼠由于药物过量致死

huarenqiang5

外观可见泡沫样液体从鼻孔溢出。解剖可见肺成暗红色，肺毛细血管、血管内皮细胞明显肿胀，肺含水量显著增加,肺水肿、炎细胞浸润等病变,伴透明膜形成,血浆IL213含量显著升高。

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问求问大佬，miRwalk数据库预测miRNA和靶基因结果怎么样，可靠性大吗？

晓雨知春来

miRwak数据库对miRNA靶基因的预测有一定参考价值,但预测结果的可靠性尚有限生物验证是最终确认mRNA靶基因关系最重要的手段。miRwalk的预测结果只能作为miRNA靶基因研究的起点需要进一步设计实验进行验证方可得出更加准确和令人信服的结论。

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问论文写作过程中如何选择文献？

sswei

1.关键词、主题词的检索。关键词、主题词一定要选择正确，才能保证你需要的文献内容的全面性。可以多选择几个主题词，扩大关键词的检索，找到更多的参考文献。2. 根据某个学者或者研究团队检索文献。可以通过直接检索这个领域有建树的学者或者研究团队，寻找他们近期发表的文章。每个领域内都有几个领军人物，他们所从事的方向往往代表目前的发展主流。因此，阅读这些组里的文献就可以把握目前的研究重点。怎么知道谁是“领军

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