实验问答22,018,165 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问请问在蛋白两端添加avi标签的个数有限制吗？

huarenqiang5

Avi-Tag：是一个15个氨基酸的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的N端和C端。融合表达后，可被生物素连接酶生物素化，为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。特点：1. 无论在体外或者体内，几乎所有的蛋白都可以在一个独特的Avi Tag位点轻易且有效地被生物素化；2

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问加尾法miRNA跑PCR，CT值始终大于30

土井挞克树

是的，表达太低的话稀释多少倍区别不大

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问为什么我用丙酮做明胶纳米颗粒时，溶液颜色是黄色而不是粉红色？

土井挞克树

因为没有避光，吸收了光中的可见光的缘故

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问质粒酶切连接产物的核酸电泳分析

土井挞克树

虽然有菌落，但是可能是菌落存在假阳性的问题，或者是存在污染，建议重新换个菌落做

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问磷的标准测定里，磷酸二氢钾为什么需要干燥，不干燥可以吗，看有些人做不用干燥

feixue7758527w

这个还是要干燥的，否则很容易变质的，变成水合物，影响实验。有的人只不过没有写罢了，估计还是干燥过的z

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问确定了miRNA的成熟序列和前体序列，怎么确定miRNA对应的DNA序列在基因组上的位置呢

周末也要努力呀

可以通过以下方法进行：1. 文献检索：通过查阅相关文献，特别是已知的miRNA数据库（如miRBase），可以找到已经报道的miRNA的成熟序列和前体序列。2. 实验验证：通过实验方法，如Northern blotting、RT-PCR、miRNA测序等，可以确定miRNA的成熟序列和前体序列。确定miRNA对应的DNA序列在基因上的位置可以通过以下方法进行：1. 基因组比对：将已知的miRNA序

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问检测动物组织中的SOD时，测量蛋白浓度可以选择BCA法吗？

高山云初

测量蛋白浓度可以选择BCA法！

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问苯酚红的颜色怎么变浅了

秋秋欣欣

颜色变浅是正常现象，后续加入的试剂的影响

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问生物成像操作步骤及方案

秋秋欣欣

1. 将麻醉的小鼠放入成像箱并关门。2. IVIS Acquisition Control Panel 选择成像模式: Luminescent (生物发光)或Fluorescent(荧光)。3. 选择曝光参数，默认值为Auto(注:也可手动调节成像参数，包括ExposureTime 曝光时间，Binning，f/stop 光圈)。4. 勾选Photography，Overlay和Alignment

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问请问一下纯化好的鸡源IFITM1蛋白放在-40℃冰箱一直保存着，已经冻融了两次了，还能再用吗，会有影响吗？

sswei

纯化好的鸡源IFITM1蛋白放在-40℃冰箱一直保存着，已经冻融了两次了，还能再用的

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问PFGE实验小片段堆积高亮是什么原因

高山云初

有可能是蛋白污染，再一点是胶孔点样的时候戳孔了

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问两个因素的交互作用除了正交实验还可以用什么啊？

feixue7758527w

我觉得还是可以用交叉分析的，其他也可以用多因素分析的。

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问索莱宝SOD测活性试剂盒来测试我们纯化出来的蛋白样品，但是要怎么计算它的酶活呀

高山云初

套用公式计算没问题，一般有几个单位足够了

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问H2SO4（1+1）是指98%优极纯和水1:1混合是不是没有100%的硫酸

高山云初

100%的硫酸只是理论上的数值

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问两个基因一起做干扰过表达的实验步骤

feixue7758527w

希望对你有用第一步:选择目标基因首先需要选择要过表达的目标基因。这个基因可以是已知的,也可以是未知的。如果是已知的基因,可以通过文献调研或数据库查询来获取该基因的序列信息。如果是未知的基因,可以通过基因组测序等方法来获取该基因的序列信息。第二步:构建表达载体表达载体是将目标基因导入到细胞中的工具。常用的表达载体有质粒、病毒和细胞质注射等。在构建表达载体时,需要将目标基因的序列克隆到载体中,

3 回答1058 围观

问脉动真空灭菌器的选型依据

周末也要努力呀

在贵实验室购买器材平台搜索后按照销量排序，选择价格合适销量高厂家有售后保证的

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问请问用DNS法（3,5-二硝基水杨酸法）测定绿豆叶片或茎的还原糖时样品应该怎么处理磨样然后离心吗

土井挞克树

研磨，分离，萃取，离心之后收集

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问求助🆘细胞种板后，想计算细胞培养板里每个孔的细胞数，应该如何操作？

huarenqiang5

计算方法：（4个大正方形内之细胞数目之和×稀释倍数× 104）/4=每 mL 悬液中的细胞数目。

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问光合测定仪3015D的人使用方法详细步骤

高山云初

1.将主机和手柄用数据线连接起来。打开电源开关,预热5-15分钟,如果环境温度低于25℃,需适当延长预热时间至15分钟左右。2.根据不同植物、不同光合速率在“默认设置参数”内设定不同的测量间隔。3.设置完成后进入测试数据界面,按“气泵”键打开气泵,使手柄叶室内的空气与主机之间进行交换。按下压柄,夹住需要进行测量的叶片。4.夹住叶片后,观察二氧化碳和湿度变化,当二氧化碳变化开始匀速下降、湿度增加时

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问如何构建PB转座子介导的外源基因在哺乳动物细胞系中能够稳定表达的载体？哪些文献可以参考并列举？

橙汁儿青柠味

设计引物pcr后，将目的片段通过酶切连接或者同源重组连接到载体上，然后转染细胞后进行药筛即可。

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