实验问答22,848,355 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问想问一下大家有观察过PCMV6表达载体和PCDNA3.1表达载体的表达效率差异吗？大概有多少倍呀？

txs900416

这两个载体都是高拷贝载体，表达也都是CMV为启动子，差异不大啊

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问免疫疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些

dxy_gwrp7ndq

主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。

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问我目前在做无脊椎动物免疫，但我想了解一下，在人体中或者哺乳动物中有没有叫做“免疫占位”的现象，通俗来说就是一种药物可以占住病毒。

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问做实验需要的抗体如何制备？

府宅

抗体制备要点：1.这个抗体用来做什么实验(ELISA、IHC、Western Blot、IF或者IP等)?（功能性要求）2.是否已有商品化的抗体可以满足以上功能需求?（便利性要求）3.抗体需要什么种属来源（兔子、山羊、大鼠或小鼠等）?（抗体属性要求）4.需要多抗还是单抗?（品质性要求）；5.已具备的抗原信息或材料（抗原信息或材料：CDS序列，重组质粒，重组蛋白、多肽等）?（可能性要求）；6.是否可

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问用什么天平或仪器称量有磁性或带静电的物体？

dxywode

电子天平春夏季使用产生静电的解决方法静电一：空气干燥，室内湿度低于45% 解决方法:我们可以在室内或电子天平周围增加湿度，使之在70%左右为宜，就会解决此问题；静电二：称量时电子天平被称物体带静电解决方法:我们可以除去被称物的静电再进行称量；静电三：天平操作者衣服或使用的工具有静电解决方法:操作者使用天平前应先用手触摸墙壁等除去静电。

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问表达蛋白的时候总是会出现内涵体，怎么避免这种情况呢？

小布丁瑶瑶

可以使用中等强度或弱的启动子，低温培养，有限的诱导，优化培养基条件，进行融合表达，可以避免出现内涵体。

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问琼脂糖凝胶电泳实验，胶染料需要等凝胶温度降至50~60℃才能加吗？做回收胶的时候，缓冲液都需要是新加入的吗

府宅

胶染料需要等凝胶温度降至50~60℃才能加，一般我们去取胶染料的时候温度就差不多降下来了，不用刻意等，胶凝固了也会影响后面的操作。做回收胶的时候，缓冲液都需要是新加入，电泳槽里的缓冲液全部换掉，防止胶回收时污染。

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问做细胞免疫荧光，最后用共聚焦显微镜观察的时候，出现如图的情况，请问是什么原因造成的呢？

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问测免疫相关的酶活，怎么准备粗酶液。

txs900416

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问重症肌无力大鼠实验的神经肌肉接头怎么定位

dxy_gwrp7ndq

α-银环蛇毒素(α-Bungarotoxin简称α-BT)与辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase简称HRP)结合物,对肌肉神经接头处N-乙酰胆碱受体的电镜定位方法

2 回答556 围观

问如何进行肿瘤组织免疫浸润分析？

dxy_gwrp7ndq

分析要点免疫基因集富集情况的比较免疫细胞评分比较免疫细胞类型在不同分组中对预后的影响免疫调节剂基因表达比较重要免疫特征分布分组比较

3 回答545 围观

问WB过程中怎么提高实验稳定性？

txs900416

主要是保证条件每次一致（例如转膜条件、液体离子强度、电压等），上样量严格相同，抗体不失效。另外每次都带阳性和阴性对照，可以防止实验操作引起的假阴性和假阳性。

1 回答448 围观

问动物组织的切片做免疫荧光出现严重的非特异性染色的原因是什么？

府宅

原因：1.抗体分子上标记的荧光素分子太多，这种过量标记的抗体分子带过多的阴离子，可吸附于正常组织上而呈现非特异性染色。2.荧光素不纯，标本固定不当等。

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问动物组织的切片做免疫荧光出现非特异性染色的原因是什么？

Kimser

1，染色时间过长，2，抗体浓度过高，3，甚至有时候贪多嚼不烂，一次性做太多切片，出现组织变干的情况，

2 回答611 围观

问免疫共定位结果怎么分析？

君君子丶

不需要建立text,直接将网页上的代码ctrl+a(全选)→CTRL+C复制到剪切板就行。在image J 中Plugins→new→在打开的页面中ctrl+V→左上角 file→save as(保存在你能找到的地方就行) 再回去，Plugins→macros→install 找到你刚才保存的文件，打开即可。你就会发现image J下面多了右侧这个血管的图标。

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问western blot实验浓缩胶的作用是什么，多少厚度的浓缩胶合适呢？

txs900416

浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选pH6.8的TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形

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问免疫组化的需要进一步结果验证么

txs900416

一般组化做的同时会做一个isotype control，从而排除假阳性的干扰，从而无需做进一步结果验证

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问为什么wb跑的条带好几条都是波浪装？分子量47 上样量30ug

府宅

1、上样体积过大可以导致，设法减少体积（提取蛋白同样条件下减少裂解液）。2、胶配的有问题，“越靠近下部越明显”说明你的胶不好。如果你在收胶的时候仔细看（把玻璃板表面去离子水洗干净）会发现下部有波浪状，即胶凝的不够均匀，自然会出现波浪状条带了

3 回答403 围观

问我想请教一下ELSIA实验中结果阴性、阳性对照显色差距较小怎么办？

dxywode

可能原因：稀释不准、加样量不准。加样时各孔均被污染；底物不新鲜，配制时间过长或被污染；试剂效价下降或超过了试剂的有效使用期；配制溶液的水质有问题。

3 回答393 围观

问免疫细胞流式分析，含量少的亚型怎么检测呢？

txs900416

看楼主使用的是什么活化模型，一般th1介导的模型就容易染出th1。此外，最好要用pma/ion/bfa联合处理细胞4-6h，才能让t细胞发挥出最大潜力，容易检测到th1/2/17/treg的分化

1 回答564 围观

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