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科研学霸天团，48小时有问必答

问请问成球实验培养的时候需要一直摇么

bamboopiggy

sphere成球实验，不需要摇，但是需要用低吸附的培养板。，

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问HD11细胞系很难活过60小时原因？

bamboopiggy

永生化的细胞系如果活不过60h，就要考虑培养条件的问题，HD11细胞系的培养条件：DMEM/F12培养基，90%；优质胎牛血清，10%。培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

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问请问养细胞过程中受到真菌污染该怎么处理？

迟C迟

CO2孵箱被真菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用无气味杀孢子剂擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把杀孢子剂喷洒成雾状，使其蒸汽弥漫。待杀孢子剂的气雾消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。预防真菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制真菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制真菌素或放

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问转染时细胞总是死的太多，而且细胞状态不好，形态也发生了变化，请问你们转染时细胞铺板会铺多少细胞呢？可以根据类型提供一下参考嘛？

bamboopiggy

看你用哪种转染试剂，按照转染试剂说明书推荐剂量进行操作

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问质粒过表达，CMV启动子转录起始位点是什么？细胞内转录出的mRNA有5'UTR吗？

天一湖医者

启动子一般位于转录起始位点的上游。启动子位于结构基因5'端上游的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特异性。

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问人心肌细胞系都有哪些？怎么选择人的心肌细胞怎么分离

天一湖医者

一类是普通的心肌细胞，包括心房肌和心室肌，含有丰富的肌原纤维，执行收缩功能，故又称为工作细胞。另一类是一些特殊分化了的心肌细胞，组成心脏的特殊传导系统；其中主要包括P细胞和浦肯野细胞，它们除了具有兴奋性和传导性之外，还具有自动产生节律性、兴奋的能力，故称为自律细胞，

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问有哪些多重免疫组化技术平台？哪个比较常用？

天一湖医者

上海阿克曼医学检验所（阿克曼病理）佰诺全景分析技术平台等

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问使用caspase 3/7检测细胞凋亡，为什么正常培养的细胞，荧光值也非常常高？

bamboopiggy

因为细胞状态可能会有自发荧光，你设好对照组，圈门就可以

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问慢病毒文库感染后，多长时间第一次收取细胞，作为基线？

bamboopiggy

一般感染起作用要48-72h，你可以48h收第一次

2 回答548 围观

问远志对小鼠的化痰作用实验中，为什么要严格控制给药到处死小鼠然后插气管的时间呀？

天一湖医者

因为灌胃给药时间过长会出现死亡或者身体消瘦、精神萎靡等症状。

2 回答404 围观

问怎么判断细胞是否染菌

未来9

只能根据经验去判断，细胞内出现小泡越来越多，细胞间有黑点布朗运动，细胞崩解，生长受限。

3 回答530 围观

问0.5%CMC-Na配置

bamboopiggy

1.充分搅拌 2，不行滴几滴乙醇（最好不加） 3，用脱脂棉垫在布氏漏斗上，抽滤，封口冷藏保存。

4 回答1266 围观

问降低样本浓度为什么有助于提升得率？

天一湖医者

在达到平衡态的可逆反应中，增加一种反应物的浓度,化学平衡向正方向移动，所以提高另一种反应物的转化率，而自身，虽然转化的物质的量增多了，但加入的物质的量比转化的物质的量大，所以减小了

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问兔子角膜板层移植实验，术后测啥细胞因子或者白介素比较好？想看角膜愈合的情况和炎症指标

bamboopiggy

将相同大小的保留的角膜或巩膜移植物与10-0尼龙间断缝合线一起移植。在手术后3至21天对移植区进行照相记录，以评估上皮伤口愈合指数（％），新血管形成和细丝的存在。在第21天分析了移植区域CD3 + T细胞和CD34 +细胞的存在。

3 回答197 围观

问为什么要严格控制给药到小鼠死亡的时间？

bamboopiggy

不知道你的实验目的是什么，但是你控制好了小鼠死亡时间，可能直接在要死之前，取材啊。

3 回答438 围观

问请问我的抗体针对的是膜蛋白，封闭加吐温会不会增加细胞膜的通透性，从而使我的抗体进入膜内呢？

bamboopiggy

你可以不用带tween的液体配你的封闭液啊，没事的，封闭，只要有奶粉或BSA，溶解在缓冲液中就可以

3 回答584 围观

问expiCHO细胞第4天开始活细胞比例开始明显下降怎么办？

bamboopiggy

注意你传代细胞的比例，不能太稀了，但是也不能太浓，一般80-90%的融合率就要传代了。

3 回答440 围观

问加不同抑制剂测细胞活力

bamboopiggy

这个不知道你是什么药，所以没法提供浓度，但是你可以查文献，看别人平时用什么浓度，你加10倍，开始做梯度。至少稀释到别人浓度的十分之一。

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问Huh7细胞克隆长不出来是什么原因

bamboopiggy

肝癌细胞系的细胞一般较小，克隆不好长，你可以多放点细胞，血清换好点的血清。

3 回答312 围观

问计数不同种类的白细胞时，用Giemsa染液染色时，染色不均匀时或者染色有沉淀是因为什么？怎么解决？

天一湖医者

Giemsa 染色，可提供对比强烈的多色性的染色，但沉淀出的染料，使细胞看起来呈斑点状。由于氧化原因，在染液表面形成沉淀，当加入水时，在整个溶液中，特别是在载玻片的表面上形成浮渣，冲洗染液时通过向上提升液面，而不是倒出液体或取出栽载玻片，在最后步骤，为防止细胞和浮渣接触，彻底冲洗以便去掉留在制备物中的浮渣。

3 回答491 围观

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