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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
请问各位大神,公司卖的PCR Mix真的比自己按照比例配置的PCR Mix 优秀很多吗?有没有人对比过?
汤姆卜丽波
实际来说如果自己配置的已经调试好了,那效果要比mix好一点,mix.主要是方便,减少误差
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问
请问有没有能够快速评价引物的质量以及评价一对引物是否匹配的软件或者在线网址?
balalaLy
primer/oligo/dnaman
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问
PCR实验出现假阳性的时是什么原因造成的?
whilt-shirt
模板降解、试剂过期、加样不准确都会导致
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问
培养液中病毒rna提取
天一湖医者
不同厂家的对比,可以参考一下选择。
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问
sw620形态正常吗
天一湖医者
从图片上看,这个sw620形态还是正常的。
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问
Rasa3flox/floxCD4cre是什么小鼠呀?
bamboopiggy
Rasa3flox/floxCD4cre是在cd4阳性细胞中,特异性敲除rasa3基因的小鼠。cd4 cre,代表的是cd4 阳性细胞特异性cre
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问
帕金森模型造模予腹腔注射MPTP(30mg/kg)换算成注射体积是多少 ml/10g?
天一湖医者
换算成注射体积可以乘1.44左右。如上30mg/kg,则换算为43ml/10g左右。
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问
物种与抗体免疫原同源75%,能用吗?
天一湖医者
免疫组化影响因素较多,不太好说,可以试下。
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问
请问各位实验大神,用cck8单纯的测细胞增值实验,数据怎么分析,可以直接用OD值作图吗
balalaLy
一般是以对照组的OD值为1转化为相对值进行做图
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问
红色荧光蛋白质粒转hek293t不亮怎么办
bamboopiggy
可能是你质粒构建有问题,尤其是diRed,容易产生移码,先检查质粒,如果没有问题,可以进行流式分选后,再做。
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问
近交系C57如何快速大量繁殖
bamboopiggy
怎么繁殖,超过10代,总会产生遗传漂变。如果10代以内,可以直接雌雄合笼,得到想要的鼠。
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问
我想敲掉一个基因,过表达另一个基因,是找公司给我做质粒转染进细胞么?
bamboopiggy
你想自己做也可以啊,找公司也行,看你的经费情况。
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问
设计引物时怎么保留完整的cds区
bamboopiggy
如果要保留完整的cds区,可以保护碱基+酶切位点+cds的start code开始的那一块,保护碱基+酶切位点+cds区的stop code 往前的一段,来设计引物。
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问
请问细菌浓度用什么方法测定比较好,如何测定?
bamboopiggy
如果你是要数菌的量的话,建议用细胞计数板来计数,OD值只是一个相对值,在0.6-0.8时,菌的状态最好。
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问
定量pcr时 重复性不好,我应该从哪些方面找原因呢?
天一湖医者
主要是加样要特别仔细,比如打出液体时确定打完,移走枪头时不要粘附液体。加样完成后顺时离心,保证液体都在底部。pcr管选择质量选择很重要,次品不可以做定量。因为它的均一度不够。
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问
建立过敏性鼻炎小鼠模型时,年龄选择有什么依据(详细)?不到年龄或者过了年龄有什么影响?
天一湖医者
年龄选择一般为6-7周,具体可以参考https://wenku.baidu.com/view/34d604dd0a75f46527d3240c844769eae009a324?bfetype=new
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问
PCR扩增后。没有条带是怎么回事
bamboopiggy
1.引物没有加全,2,酶坏了,3,模板没有加,4,引物特异性不好。5,pcr仪坏了。
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问
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因一般是什么呢
天一湖医者
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有:①必要时重新设计引物;②减低酶量或调换另一
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问
pcr产物电泳会有气溶胶污染吗,怎么解决呢
天一湖医者
pcr产物电泳会有气溶胶污染。PCR产物污染的形式是气溶胶污染。在空气与液体面摩 擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样 枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝,因而由 其造成的污染是一个值得特别重视的问题.
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问
请问需要做浓度梯度还是单一浓度呢?
bamboopiggy
可以分成正常组 造模+安慰剂组 造模+阳性对照组 造模+试验药组,只要有明显差异,没必要非要做三个组。
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