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科研学霸天团,48小时有问必答
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非变性蛋白电泳,植物总蛋白提取液buffer配方是什么呀
迟C迟
蛋白质提取液:300ml1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
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问
做蛋白组学Prm之前还需要做什么实验吗
汤姆卜丽波
做 LC-MS/MS 质谱PRM检测之前,要做以下实验准备,蛋白提取、浓度测定及 SDS-PAGE 凝胶检测,质检报告;蛋白酶解、除盐,冻干机冻干;高分辨 LC-MS/MS 质谱DDA检测,搜库定性,选择母离子,高分辨,最后质谱检测,定量分析,完整报告整理。
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问
🔥 # 话题探讨 # :如何规划科研生涯 ?
心细北方
首先眼光不好太高,刚毕业的学生大部分水平都差不到哪儿去,先到合适较满意的工作即可,后期靠自己的努力和发展,机会还有很多的!
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问
非变性蛋白电泳,植物总蛋白怎么提取呀?
迟C迟
一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清液,样品制备完成。 蛋白质提取液:300ml 1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml 2、甘油(Gl
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问
青霉素链霉素双抗试剂变浅绿色浑浊状是怎么回事呢?
天一湖医者
青霉素链霉素双抗试剂变浅绿色浑浊状一般是细菌或支原体污染了
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问
羧甲基纤维素钠的粘度?
whilt-shirt
暂时没有有关CMC-Na在灌胃方向对于粘度指标得报导。一般的,建议在保证溶解度的前提下,选择粘度尽量小的CMC-Na。文献中一般在 1500 mPa.s 以下
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问
有没有适合新手做的生信综合实验
天一湖医者
可以尝试一下h1n1流感病毒分析.
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问
响应面分析方法实际值与预测值之间的差异如何理解?怎么设计试验减少二者差异?
汤姆卜丽波
响应面分析得到的优化结果是一个预测结果,需要做实验加以验证。 如果根据预测的实验条件,能够得到相应的预测结果一致的实验结果,则说明进行响应面优化分析是成功的;如果不能够得到与预测结果一致的 实验结果,则需要改变响应面方程,或是重新选择合理的实验因素与水平。
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问
小鼠饲养过程中生长速度不一样,应该如何处理?
bamboopiggy
找个体差不多大的小鼠做实验,太大或太小的舍弃。否则一开始variation就太大了
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问
请问有知道苯溴马隆如何溶解到培养基的大神嘛。
balalaLy
可以试一下助溶剂PEG和吐温80,注意稀释的时候要先加助溶剂最后加水或者dmem
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问
转染后出现黑色细沙颗粒
bamboopiggy
可能是你293细胞已经被支原体污染了,不转质粒的时候,变化不明显,你看不出来,建议换一株做。
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问
最近细胞一直污染,基本都是这种,请问这是什么污染,怎么处理
balalaLy
细胞污染属于概率问题,很难搞清楚是属于哪种污染,直接弃掉最省时省力
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问
细胞污染了,知道这是什么菌污染吗?
balalaLy
确定是污染直接扔掉就好了,不用纠结是什么污染。就像黑胶虫污染,只是个传说,真正见过黑胶虫长啥样的有几个
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问
EP凝胶的聚合缓冲液是什么?
dxywode
琼脂糖凝胶电泳缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE,而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。
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问
悬浮细胞做转染,lip3000,6孔板每孔种多少细胞转染效率比较高,现在种15万个细胞每孔,感觉转染效率不高
dxywode
如遇转染效果不佳,可采取优化方案对实验进行优化:1. 优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。2. 同时细胞污染也是造成细胞死亡,转染效率低下的一大原因。转染细胞用的质粒必须保证无菌。分享一个小秘诀:将提完质粒后或者提的最后一步,用75%乙醇沉淀,这样就除菌了。3. 转染用的质粒首先要保证数量,一般为2μg以上。如果质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他
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问
染色体做完镜下看是实心的,像一个细的木棍
dxywode
只能是大概说一下,因为缺少图,其实你多看一些片子就会发现,做核型分析的时候,视野中出现的结构应该有分离良好的染色体,边缘很粗糙的圆形,边缘光滑的圆形大致三种类型。边缘粗糙的那种就是染色质在形成染色体的过程中。丝状的染色质盘绕在一起,是很难分开的,表现出来就是一个圆形的细胞核的样子。
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问
做qPCR必须每次要做三个生物学重复和三个技术重复吗
balalaLy
技术重复是同样的sample在一次pcr实验中重复三个复孔,你加样熟练的话也可以只做2个复孔。三次生物学重复是收三批sample
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问
qPCR实验平行的孔总是重复性很差,该怎么改进呢?加样时有推荐的先后顺序吗?
balalaLy
每个孔加的量很低,要留意一下有没有把样品都完全打出去了,枪头上有没有残留
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问
qPCR的实验数据如果有很多该怎么处理呢?数据少还能一点一点算,但是多的话,真的很头疼啊
whilt-shirt
可以做一个Excel公式模板,数据复制后就能直接得出结果
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问
巢式PCR是利用PCR的产物又进行了一次PCR吗?巢式PCR的产物在跑胶时样品不进胶是怎么回事,试过调Ph值,但是不管用
汤姆卜丽波
可能不是ph的问题,有可能是pcr产物蛋白污染了,所以在孔洞里不进胶
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