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科研学霸天团,48小时有问必答
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盐酸羟胺和哌嗪乙酸乙酯的反应条件不好摸索,有没有做过类似反应的大佬。
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问
沙眼衣原体感染细胞的实验需要在什么等级的实验室进行啊?
天一湖医者
沙眼衣原体感染细胞的实验需要在二级的实验室进行。
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问
求助,结晶紫染色后测完吸光度得到值后怎么计算啊
bamboopiggy
从板上每个孔的平均吸光度中减去没有细胞的孔的平均吸光度以减去背景. 然后再拿实验组和你的对照组比就好了。
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问
结直肠癌转染
秋秋欣欣
220-300V都可以,或者就用脂质体转染
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问
求助:流式单标峰形奇怪
天一湖医者
有可能是本身就是很多峰构成的,但由于制备液相上所连接的制备柱的规格或者进样的浓度大等因素导致峰与峰之间分离度降低,进而形成了一个单峰,而制备出来,再经分析液相检测时,原来单峰中所包含的那些峰就显现出来了;或者是在制备后回收的过程中,受热或者光照等因素的影响,导致化合物变性或者降解,也会出现这种情况。如果是前者,那么可以降低样品浓度或者调整流动相的比例,使峰得到很好的分离,也可以试试不同填料的色谱柱
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问
想知道同源重组对于链霉菌有什么特殊需要注意的吗
府宅
用硫链丝菌素抗性基因作为筛选标记,可以简单直接地获得可能发生同源重组的菌株,以便进一步从分子水平上用杂交进行验证
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问
请问大家有做过原生质体实验的大佬呀
迟C迟
我们实验室常做水稻和大麦原生质体,欢迎来问具体实验细节。
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问
小鼠脑部小胶质细胞免疫荧光
bamboopiggy
我看着你这个图可以,你可以参考一下人家文献里的图片,或者是你选的位置改改
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问
PEI转染293T细胞和293S细胞,转染效率差异大吗?有了解293S大规模转染条件的吗?
灵枢天问
293T 和293S转染效率差异不大,都属于相对好转染的细胞,转染条件就是看你用的转染试剂了,根据你的试剂说明书来
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问
想问一下,在wb时,配制5%的脱脂奶粉,有的用pbst稀释有的人用tbst稀释,两个缓冲液有什么区别吗?
bamboopiggy
都是缓冲液,问题不大,我 喜欢用pbst,因为不需要调ph值,tbst是需要调ph值得,但是有人说tbst对磷酸化得蛋白好。
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问
请问pcrtargeting的bt340是什么的原理
汤姆卜丽波
BT340是一种温敏型质粒,在42℃高温诱导下质粒 BT340 可以表达 FLP 重组酶,FLP 重组酶可以识别质粒中安普抗性框两侧的 FRT 序列,将 FRT 之间的抗性基因敲除,在此过程中质粒 BT340 消失,之后原基因插入抗性基因的部分仅剩下 81bp 的 scar 序列 FRT 序列经 FLP酶切除后剩余的部分序列),所得即为原基因内部被敲除的重组质粒 。
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问
基因测序结果有两个碱基突变,还可以用吗
府宅
如果是表达的话,只要氨基酸序列没有改变,接下来的实验还是可以继续的,如果在其他区域,如果此位点不是你的核心区域,个人认为影响不大。
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问
小鼠造模打完肿瘤细胞后量瘤子忽大忽小,什么原因?
汤姆卜丽波
可能是种的时候引发了炎症,一直在炎症反应,不断的反复吸收
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问
wb实验,应什么软件可以分析不同蛋白的表达情况?
balalaLy
一般用imageJ软件,直接网络搜索,有非安装版,非常好用
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问
wb实验过程,想分析蛋白蛋白的表达情况,上样体积是否一致?
balalaLy
上样体积要求尽量一致,是为了保证每个孔在跑的过程中压力一致。不然隔壁孔的蛋白会往旁边体积少的地方歪。
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问
流式分析细胞凋亡实验中如果消化贴壁细胞前用PBS清洗,那不是把凋亡细胞都洗掉了吗
我不是药神88
流式处理细胞的时候,pbs要轻柔冲洗细胞1次,目的是为了去掉培养液(含血清的),以防止血清终止胰脢的消化;这之前倾倒培养液之后,用pbs处理1次细胞,并不会对起产生特别大影响,注意不要用枪头直接吹打细胞,这样基本上不会影响实验结果。过度吹打细胞会造成细胞机械性死亡。
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问
质粒转染,PEI的用量与细胞数有关,还是与质粒数有关?PEI的量不能超过多少?
bamboopiggy
和质粒的量有关,和细胞的数目也有关,一般细胞融合度到50%-60%开始做转染,按照不同的比例如1:2-1:8的比例来配转染试剂。
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问
质粒转染中,在不对细胞活率影响下,平均单个细胞能承受多少拷贝质粒,或多少质量的质粒?
汤姆卜丽波
一般单个细胞根据质粒的大小来看,转染效率比较好的话可以接受2-3个,差不多的话基本一对一
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问
质粒导入载体失败咋办?
天一湖医者
排查问题的话,先查酶有没有问题(连接酶连别的片段和载体试试看,还有酶切产物纯化后直接转化看长多少菌落来判断酶切是否成功),然后插入片段可以用TA克隆去测序看是不是PCR成功。
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求助:蛋白重组表达
bamboopiggy
先确定你蛋白表达载体确实构建成功,然后再重新挑个菌试试,可以加大一下菌液的量
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