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科研学霸天团，48小时有问必答

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问食管癌心理Meta

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从杂志的级别和作者评价来看，《中国心理卫生杂志》的投稿难度很大，需要论文高度贴合杂志社要求，只要是格式不符合的会马上被拒。

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问meta分析审稿人意见求助

土井挞克树

这个要么改变关键词，或者筛选也采取多人筛选

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问制备细胞透射电镜样本的几个问题

Dr_劉医生

常规步骤都需要，先用酶消化下来大部分贴壁的细胞，再用预冷的PBS液来冲洗残留的部分细胞

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问一抗的选择要点和技巧是什么？

土井挞克树

（1）选择单克隆还是多克隆抗体。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体，单克隆抗体能目标明确地与单一特异抗原决定簇结合，就象dao弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对较低；而多克隆抗体特异性稍弱，抗体的亲和力强，灵敏度高，

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问过氧化氢浓度检测方法是什么

Dr_劉医生

一般用DPD法和草酸钛钾法，具体步骤见附上的参考文献，分别对应1和2的方法；1. Spectrophotometric determination of trace hydrogen peroxide via the oxidative coloration of DPD using a Fenton system. Chemosphere 224 (2019) 646-652. https://

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问转染后种瘤变黑什么原因呢？

Dr_劉医生

看着像是红黑色的组织块，种瘤后消毒有没有保证好，裸鼠恢复能力不行，个人建议还是组织出血后的表现

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问流式细胞仪算药物ic50值

Dr_劉医生

可以，但只能是间接测量，用药物抑制实验来看细胞的数量，然后用流式来检测细胞的变化数，间接推算IC50，得到数据后用graphpad prism分析就行

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问T2细胞结合力试验

大壮TCCZ

想知道不加的话做出来了吗，我的没有加一直都没有阳性结果，想知道是不是这个原因555

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问流式中检测细胞表面和细胞内蛋白表达水平的抗体有什么不一样吗？

土井挞克树

抗体只是针对相应抗原的，至于是针对胞内还是胞膜对你检测来说并无明显影响，你只需要查清楚到底是针对哪一个部位的抗原的，应该是可以用同一种抗体进行检测的，在流式操作时只需注意：如果是针对胞内，则需要加破膜剂，让抗体能和相应抗原接触，否则就不需要了。

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问使用 DSS构建IBD小鼠模型的时间？

土井挞克树

造模方法：Balb/c小鼠适应性饲养1周后进行实验，小鼠于第 1~5 、第 11 ~ 15 、第 21 ~25 天分别灌胃3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液，其余时间给与蒸馏水，共30天，建立慢性结肠炎模型。造模成功后，药物组分别每天灌胃低中高剂量药物水溶液，正常组和模型组灌胃等量蒸馏水，连续给药7天后取结肠组织进行HE染色，ELISA检测炎症因子IL-1β和TNFα含量。模型验证：HE染色

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问想将酶固定在玻璃片上应该怎么做？

天一湖医者

吸附法利用各种吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上而使酶固定的方法.通常有物理吸附法和离子吸附法.常用吸附剂有活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃等.采用吸附法固定酶,其操作简便、条件温和,不会引起酶变性或失活,且载体廉价易得,可反复使用.载体结合法最常用的是共价结合法,即酶蛋白的非必需基团通过共价键和载体形成不可逆的连接.在温和的条件下能偶联的蛋白质基团包括：氨基、羧基、半胱氨酸的巯基、组氨

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问如何配制能长时间保存的化学试剂

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丙酮属于有机溶剂，具有较强的溶解有机物的能力。普通塑料瓶含有低分子有机物能溶解于丙酮，所以不能装，需要特殊的瓶来装。一般用棕色玻璃瓶装丙酮。

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问免疫荧光染色假阳性？？

土井挞克树

有可能是假阳性，重新做一遍试试看。

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问作为甲类传染病的雹乱进行大量活菌的实验操作应该在哪种级别的实验室？

天一湖医者

作为甲类传染病的霍乱进行大量活菌的实验操作应该在BSL-4级别的实验室:。

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问筛选shRNA跑q跑不出来怎么办

balalaLy

有可能是shRNA不行，重新再找一条

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问流式实验做完后，细胞可以回收吗

balalaLy

可以是可以，但是会比较麻烦，一般很少有人回收。

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问中药成份分析，指纹图谱

Dr_劉医生

建议做质谱分析就行，适用性广；指纹图谱麻烦，但特异性强

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问怎么控制免疫试验的温度？

土井挞克树

可以选择恒温水浴，恒温实验台等。

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问药动学参数计算

土井挞克树

主要符合线性关系，也可以用曲线下面积计算

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问类器官培养用哪种培养基呀

土井挞克树

类器官可以使用琼胶培养基，在化学小分子抑制剂/激活剂、细胞因子、培养基添加剂等物质作用下经过培养得到的相应器官类似的组织结构。

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