实验问答22,291,765 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问求CHIP实验的详细步骤？

府宅

1) 将细胞或组织进行固定（交联）与裂解该步骤是在新鲜组织或活细胞中加入甲醛（终浓度1%），目的是稳定蛋白与DNA天然结合的状态，以免后续的实验步骤破坏这种相互作用。在固定完成后，细胞或组织进行充分裂解。固定时间一般为5-10 min，太长的固定时间将不利于后续的染色质片段化。强相互作用，如目的蛋白是组蛋白，固定时间应短一些：3-5 min。弱相互作用，尤其是间接相互作用蛋白，可适当延长固定时间，

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问wb 条带异常问题的出现原因？

dxy_gwrp7ndq

1、阴性结果的原因1) 二抗条件过低：提高二抗浓度、延长二抗孵育时间或孵育温度2) 一抗条件过低：提高一抗浓度、延长一抗孵育时间或孵育温度3) 抗原过少：提高上样量4) 抗体种属不兼容：一抗species reactivity中是否有需要检测样品的种属来源，一抗与二抗是否相匹配5) 酶活性：二抗上标记的HRP或AP等酶活性降低，如抗体过期或反复化冻等6) 封闭过度或封闭剂不兼容：降低封闭剂浓度、缩

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问请问一下包埋块切大了怎么办

府宅

最简单的方法就是把组织块修一下，分成2～3块包埋

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问免疫切片越薄越好吗？

小布丁瑶瑶

冷冻切片并不是越薄越好，普通组织厚度约6微米即可，过薄，则易造成组织皱缩和镜下细胞核的碎裂。但是淋巴组织由于细胞间质少，切片可达4-5，脂肪组织要8-9方可观察到完整的脂肪细胞。组织结构单一的可薄切，含脂肪多的，结构复杂及硬度较大的可适当厚切。总之，以切出完整，平滑的切片为准。切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带，可避免组织摊片过程中皱褶，保证组织结构的完整及切片的美观。

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问wb怎么进行归一化，标定内参蛋白，如何确定上样量？

dxy_gwrp7ndq

你做好实验的“阳性对照”、“阴性对照”，然后保持与“试验处理样品”同样的样品上样量，再然后对pvdf膜进行剪切以及分别的抗体（内参抗体、目标蛋白的特异性抗体）孵育就可以很放心地做后续分析了。

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问免疫组化染色怎样做效果更好？

LFF520宣城

为达到免疫组织化学技术的要求，组织固定越新鲜越好；组织脱水必须彻底干净；切片必须完整、均匀、平展、无邹折；切片的附贴必须牢固，必须使用合适的粘贴剂；切片必须烘烤附贴牢固，既要经得起抗原修复时高温的作用而不使轻易脱片，又不至于破坏抗原；切片脱蜡必须干净，否则将会影响免疫组化染色的最后结果。

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问除了空气过滤系统，还有可靠的去除核酸污染清洁剂吗？

府宅

对可疑器用稀酸进行擦拭或浸泡，紫外线照射，对反应液用DNaseⅠ或内切酶进行处理等方法。

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问请问，雌雄C57老鼠做在体实验差异会很大嘛？有哪些疾病模型使用雄性C57，那些模型选用雌性C57呢？

txs900416

雌雄会有一定差异，例如，ConA注射的雌鼠肝损伤比雄鼠要重；eae在雌鼠中发病较高和严重，雄鼠则不敏感；器官移植中一般使用雄性c57做受体，因为好补液

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问基础实验的结果和临床观察不一致，容易发文章吗？

陈文豪平邑

不容易，临床医生在临床试验的设计和实施过程中扮演重要角色，同时，临床医生、临床试验方法学家、临床试验管理专业人员通力合作，才能确保临床试验的高质量设计、实施、分析和报告。

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问如何解决容量瓶刻度上方液体沾壁问题

今天摆烂了咩

1.容量瓶清洗至无水珠挂壁，晾干备用2.定容时候悬空3.滴加之后可以静置片刻

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问减重法称量时，如何避免产生负值？

候季雨

避免天平周围环境气流波动，称量纸位置放准确。

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问重症肌无力进展期免疫类药物使用的实用性有多高？

337 围观

问请问有关于等温滴定量热的相关内容吗？

dxywode

等温滴定量热（isothermal titration calorimetry，ITC）与荧光偏振类似，也是一种研究生物分子间相互作用的先进技术手段。ITC检测方式与化学反应中的酸碱滴定法相似，在ITC测定中，首先将一种反应物置于一个温控样品池中，并通过一个热电偶回路与一个参比池相偶联，样品池和参比池处于相同的外部环境。特定的滴定剂（按实验需要选择）定量滴加到样品池中，当样品与滴定剂发生反应时，样

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问同一管稀释后的一抗，跑不同批次的同种处理的样品，条带由单条带变成了多条带，操作是没变的，就只有样品批次不同，是怎么回事呢？

颜渊溪桥

如果抗体稀释液不是反复用过的，如果两次跑胶操作没问题，如果样品没有降解，那可能是个实验现象嘞，主要是得看同样没问题的操作下重复的结果。

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问为什么电泳的条带歪的，并且如何计算上样量？

小布丁瑶瑶

第一，所配制的胶有问题。比如:配方有没有错、浓度有没有错或者高低。凝固时间是否合适。第二，所配的电泳缓冲液问题。比如，配方浓度等是否正确。跟换缓冲液，重新配制。第三，电泳条件。电泳条件是否合适，电泳电压、电流和时间影响。电压是否稳定。这三者是出现电泳效果不好的主要原因。试着去改善，看能不能解决问题。当然了可能还有其他方面问题。

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问关于免疫组免疫荧光是选石蜡切片好还是冰冻切片好？中染色不均的，该如何考虑？

dxywode

免疫组织荧光，一定首选冰冻切片而非石蜡切片。两者的区别主要在于冰冻切片能较完整地保存抗原免疫活性，但组织结构会受到冰晶等的影响而变形，石蜡切片则相反。虽然石蜡切片可以做抗原修复，但是，它不是麻烦嘛！

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问消除过氧化物酶，用过氧化氢的多吗？成品的内源性氧化物酶阻断剂效果咋样？

小布丁瑶瑶

消除过氧化物酶实验室用过氧化氢挺多的，成品的内源性氧化物阻断剂过氧化酶是催化剂，是蛋白质成分，效果挺好的，希望帮到您喔。

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问免疫荧光是选石蜡切片好还是冰冻切片好？

Kimser

个人倾向于石蜡切片，毕竟条件有限，虽然可能稍微麻烦点，时间长点，但是保存的时间也长，这点挺不错的

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问COIP研究蛋白互作过程中，待检测的蛋白分子量在55kD时，经常被抗体的轻重链挡住，有什么好的解决方案

txs900416

使用不同来源的抗体做ip和验证可以避免，如果所有抗体都是相同来源的，可以使用二抗为抗相应igg轻链的抗体验证

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问免疫组化怎么防止封闭过度

今天摆烂了咩

封闭不充分出现非特异性结合，可以延长封闭时间，同时担心封闭过度导致染色弱，这就需要封闭时间最好不超过十分钟，实验的具体条件最终还是要自己摸索的，可在十分钟范围内自行摸索一下最合适的时间再进行实验

2 回答889 围观

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