实验问答22,292,096 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问测免疫相关的酶活，怎么准备粗酶液。

txs900416

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问重症肌无力大鼠实验的神经肌肉接头怎么定位

dxy_gwrp7ndq

α-银环蛇毒素(α-Bungarotoxin简称α-BT)与辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase简称HRP)结合物,对肌肉神经接头处N-乙酰胆碱受体的电镜定位方法

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问如何进行肿瘤组织免疫浸润分析？

dxy_gwrp7ndq

分析要点免疫基因集富集情况的比较免疫细胞评分比较免疫细胞类型在不同分组中对预后的影响免疫调节剂基因表达比较重要免疫特征分布分组比较

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问WB过程中怎么提高实验稳定性？

txs900416

主要是保证条件每次一致（例如转膜条件、液体离子强度、电压等），上样量严格相同，抗体不失效。另外每次都带阳性和阴性对照，可以防止实验操作引起的假阴性和假阳性。

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问动物组织的切片做免疫荧光出现严重的非特异性染色的原因是什么？

府宅

原因：1.抗体分子上标记的荧光素分子太多，这种过量标记的抗体分子带过多的阴离子，可吸附于正常组织上而呈现非特异性染色。2.荧光素不纯，标本固定不当等。

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问动物组织的切片做免疫荧光出现非特异性染色的原因是什么？

Kimser

1，染色时间过长，2，抗体浓度过高，3，甚至有时候贪多嚼不烂，一次性做太多切片，出现组织变干的情况，

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问免疫共定位结果怎么分析？

君君子丶

不需要建立text,直接将网页上的代码ctrl+a(全选)→CTRL+C复制到剪切板就行。在image J 中Plugins→new→在打开的页面中ctrl+V→左上角 file→save as(保存在你能找到的地方就行) 再回去，Plugins→macros→install 找到你刚才保存的文件，打开即可。你就会发现image J下面多了右侧这个血管的图标。

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问western blot实验浓缩胶的作用是什么，多少厚度的浓缩胶合适呢？

txs900416

浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选pH6.8的TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形

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问免疫组化的需要进一步结果验证么

txs900416

一般组化做的同时会做一个isotype control，从而排除假阳性的干扰，从而无需做进一步结果验证

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问为什么wb跑的条带好几条都是波浪装？分子量47 上样量30ug

府宅

1、上样体积过大可以导致，设法减少体积（提取蛋白同样条件下减少裂解液）。2、胶配的有问题，“越靠近下部越明显”说明你的胶不好。如果你在收胶的时候仔细看（把玻璃板表面去离子水洗干净）会发现下部有波浪状，即胶凝的不够均匀，自然会出现波浪状条带了

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问我想请教一下ELSIA实验中结果阴性、阳性对照显色差距较小怎么办？

dxywode

可能原因：稀释不准、加样量不准。加样时各孔均被污染；底物不新鲜，配制时间过长或被污染；试剂效价下降或超过了试剂的有效使用期；配制溶液的水质有问题。

3 回答379 围观

问免疫细胞流式分析，含量少的亚型怎么检测呢？

txs900416

看楼主使用的是什么活化模型，一般th1介导的模型就容易染出th1。此外，最好要用pma/ion/bfa联合处理细胞4-6h，才能让t细胞发挥出最大潜力，容易检测到th1/2/17/treg的分化

1 回答545 围观

问96孔细胞板洗板，细胞老是萎缩或者没了

dxy_gwrp7ndq

可以用排枪轻微吸打，然后再把细胞培养基靠一侧吸出来，尽量减少与板底部的接触，用吸水纸吸一下

2 回答510 围观

问Wb半定量怎么做，怎么标定？

txs900416

所谓的半定量，是将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量，得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量，再用此数值进行样品间的比较和分析，得到目的蛋白含量在不同样品间的实际变化结果，是一个比值差异的统计学分析。

1 回答496 围观

问请问为什么同一条带，每次涂显影液会出来趋势不一样的结果？怎么样涂才能使结果更准确？

txs900416

一般考虑是显影液涂抹不均匀，曝光时间不一导致。建议将胶浸泡入显影液几十秒，再拿出来曝光

2 回答437 围观

问ELISA可以检测外泌体吗？不用来源的样本前期处理对实验结果有很大影响吗？

Omiget12

基本很少用这种方法检测外泌体。大多用的是WB检测外泌体蛋白，NTA检测外泌体颗粒数和大小，电镜观看外泌体形态。这三种是最常用的

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问怎么设计实验用CO-IP（CO-Immunoprecipitation）验证两个蛋白是否互作呢？

txs900416

最基本的方法是用ip级别的抗体钓取一个蛋白，跑wb检测是否钓取的蛋白中是否有另外一个蛋白的存在。如果没有ip级别的抗体，则需要在细胞系中共表达两个蛋白，使得其中一个带tag（例如his，ha，flag等），使用抗tag的抗体钓蛋白，检测另一个蛋白，从而验证蛋白是否互作

2 回答706 围观

问请问免疫细胞和肿瘤细胞共培养怎么操作

dxy_gwrp7ndq

因为淋巴细胞是悬浮生长，而肿瘤细胞一般要贴壁生长，所以可以采用简单的混合共培养的方法；如果是要有效的刺激淋巴细胞，选用合适的DC细胞也很关键；如果是要检测细胞因子的作用，也可采用共培养的方法；总之，目的不同，方法也不尽相同可以尝试这样一个方法,目的是看人外周血细胞是否被肿瘤细胞所刺激：肿瘤细胞贴壁培养，3000拉德照射或丝裂霉素处理使得细胞不再增殖，但仍保持存活，提取人外周血单个核细胞，与肿瘤细胞

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问红色蛋白使用什么拷贝数的质粒可以更好的显色？

txs900416

取决于表达及细胞毒性之间的一个平衡，之前一些红色蛋白易形成多聚体且有细胞毒性，所以表达多的容易导致细胞死亡。后来经过改进这些红色荧光蛋白毒性都减弱了，一般来说对于稳转株拷贝数高低无所谓，对于瞬转还是建议用高拷贝质粒

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问如何选择合适的诱导剂并设计诱发炎症反应的梯度实验？

府宅

用实验来测定诱导时间比较容易，培养多瓶菌液（起始浓度要一样且要非常小，要来自同一菌株，最好先挑菌富集，然后平均分装到至少每瓶35mL的培养液里），放到摇床上摇，每隔一段时间去测OD600值，画生长曲线，看图画到指数中期时候就可以诱导了。若时间确定，那么可以设置诱导剂浓度为梯度0.1-1.0去测试哪一个浓度是最适的。设置方法和时间是一样的，注意哪些浓度等的变量要一样。温度就设置温度梯度喽，诱导剂浓度

1 回答460 围观

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