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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
兔子角膜板层移植实验,术后测啥细胞因子或者白介素比较好?想看角膜愈合的情况和炎症指标
bamboopiggy
将相同大小的保留的角膜或巩膜移植物与10-0尼龙间断缝合线一起移植。在手术后3至21天对移植区进行照相记录,以评估上皮伤口愈合指数(%),新血管形成和细丝的存在。在第21天分析了移植区域CD3 + T细胞和CD34 +细胞的存在。
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问
为什么要严格控制给药到小鼠死亡的时间?
bamboopiggy
不知道你的实验目的是什么,但是你控制好了小鼠死亡时间,可能直接在要死之前,取材啊。
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问
请问我的抗体针对的是膜蛋白,封闭加吐温会不会增加细胞膜的通透性,从而使我的抗体进入膜内呢?
bamboopiggy
你可以不用带tween的液体配你的封闭液啊,没事的,封闭,只要有奶粉或BSA,溶解在缓冲液中就可以
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问
expiCHO细胞第4天开始活细胞比例开始明显下降怎么办?
bamboopiggy
注意你传代细胞的比例,不能太稀了,但是也不能太浓,一般80-90%的融合率就要传代了。
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问
加不同抑制剂测细胞活力
bamboopiggy
这个不知道你是什么药,所以没法提供浓度,但是你可以查文献,看别人平时用什么浓度,你加10倍,开始做梯度。至少稀释到别人浓度的十分之一。
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问
Huh7细胞克隆长不出来是什么原因
bamboopiggy
肝癌细胞系的细胞一般较小,克隆不好长,你可以多放点细胞,血清换好点的血清。
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问
计数不同种类的白细胞时,用Giemsa染液染色时,染色不均匀时或者染色有沉淀是因为什么?怎么解决?
天一湖医者
Giemsa 染色,可提供对比强烈的多色性的染色,但沉淀出的染料,使细胞看起来呈斑点状。由于氧化原因,在染液表面形成沉淀, 当加入水时,在整个溶液中,特别是在载玻片的表面上形成浮渣,冲洗染液时通过向上提升液面,而不是倒出液体或取出栽载玻片,在最后步骤,为防止细胞和浮渣接触,彻底冲洗以便去掉留在制备物中的浮渣。
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问
我的CHX(用DMSO溶的)实验是0 2 4 6h,请问对照的DMSO应该在什么时候加呢?
bamboopiggy
可以在一开始的时候就加上,然后和6h的一起收。因为DMSO单纯应该是不起作用的,时间就按最长的来。
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问
组织蛋白含血量太多了影响后续实验,怎样在裂解组织前应用红细胞裂解液呢?是把组织剪碎后用红细胞裂解液吗?
dxy_gwrp7ndq
新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液, 再加入红细胞裂解液
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问
有什么评价瞬转效率的方法吗(质粒进入细胞的多少)?而不是瞬转后蛋白表达效率。
bamboopiggy
转个带荧光的空质粒,可以根据荧光的强度,来判断瞬转的效率。
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问
慢病毒感染293S悬浮细胞,感染效率低,有什么提高感染效率的方法吗?除了离心
bamboopiggy
提高一下病毒浓度试试,可以用PEG8000来浓缩病毒。
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问
流水细胞中细胞死亡有点多?
bamboopiggy
可能使细胞浓度低,通过的速度太快,对细胞损伤大,最好提高一下细胞浓度,或降低一些通过速度,
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问
流式细胞分选速度如何确定?
bamboopiggy
这主要取决于要求通过的细胞的数目,如果你的细胞密度高,就可以降低一下速度,细胞密度低,就要加速,对细胞损伤就大一些。
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问
远志对小鼠的祛痰作用机制是什么,为什么是灌胃而不是注射
bamboopiggy
远志中含有丰富的植物皂甙,这种物质可以作用于能胃粘膜,刺激胃粘液的分泌,引起患者产生轻度恶心的感。 呕吐感形成以后,就刺激支气管产生连锁反应,分泌更多的物质来祛痰,所以对于痰多不化的人去,有较好的改善作用。所以这个玩意,要刺激胃黏膜,需要灌胃
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问
慢病毒文库感染293T细胞,怎么确定MOI=0.3?
bamboopiggy
MOI的计算方法:MOI值=病毒滴度(TU/mL)×病毒体积(mL)/细胞个数,你可以调整病毒的加入体积和细胞的个数,使MOI=0.3
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问
慢病毒稳转293细胞后,有的细胞会变大,有空泡状,是什么原因呢?
bamboopiggy
慢病毒对293细胞是有影响的,如果变大的细胞,和空泡的细胞不多,那就不用管,如果细胞数目多,需要降低加入病毒的浓度。
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问
fed batch过程中细胞数过多怎么降低细胞数提高活率
dxy_gwrp7ndq
可以适当提高补料渗透压,减缓细胞生长
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问
质粒转染过程中对转染细胞的要求有哪些?
dxy_gwrp7ndq
转染时细胞密度以 70~90%(贴壁细胞)或 2×106~4×106细胞 / mL(悬浮细胞)为宜,细胞密度过高会严重影响细胞状态(周期进程阻滞,凋亡增加等)
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问
表达量高的亚克隆细胞,个头特别大,一般细胞直径在16-17左右,但是它能到20左右,而且细胞数少,有什么方法可以降低细胞直径
bamboopiggy
是不是你的这个基因影响细胞的size?你可以直接挑出单克隆,进行单独培养,看看是否和正常的有差异。
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问
分选纯度的影响因素有哪些?
bamboopiggy
标本制作要轻柔,最好提前做个预实验,不要上来就直接做
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