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实验问答28,305,413 科研人在看

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问请问形成包涵体的融合蛋白，能使用包涵体裂解液之后，用Glutathione Sepharose 4B亲和层析吗？

天一湖医者

使用包涵体裂解液之后，最好选择Glutathione Sepharose这样载量更高,流速更快.

1 回答510 围观

问请问大家常用于亚细胞定位做内质网标记都有哪些？

bamboopiggy

ER-Tracker™ Green (BODIPY® FL Glibenclamide)，或者用ERp72 ，PDI 抗体都可以

2 回答1063 围观

问请问多高浓度的SDS,Triton100,NP40可以导致细胞核破裂？

bamboopiggy

不建议用sds，因为里离子型去垢剂，裂解强度比较大，一般建议用triton100 ，或np40。NP40 0.0.5% 作用5min，可以裂解掉细胞膜。

3 回答5987 围观

问放线菌中色素的分离大概需要多少色素提取物

天一湖医者

色素0.15g溶于50ml水中就可以。

1 回答511 围观

问干细胞在培养瓶里一般4小时左右可以贴璧，8小时完全铺展，做迁移测试时放多长时间合适呢？

天一湖医者

一般认为24h为细胞的一个周期，在选取合适的时间点(6，12，24h)检测划痕宽度时，最好不要超过细胞一个周期的时间;③ 如果要单纯考虑细胞迁移，可以先用丝裂霉素(1μg/ml)处理1h，抑制细胞的分裂。

3 回答1960 围观

问干细胞CFU计数问题

bamboopiggy

造血干细胞的集落形成检测：1)将所需要的MethoCult®培养基在2-8℃过夜或室温融化。(2)用16 号钝针头的注射器将培养基分装于流式管中（3.3ml/管）(3)准备三个35 mm的培养皿，制备双份培养系统。具体方法如下：把两个35mm的带盖培养皿和一个盛有水的35mm无盖培养皿一起放置到100 mm的培养皿中。(4)准备CD34 细胞，细胞计数仪计数后用0.3mlIMDM 2%FBS稀释细

2 回答1087 围观

问细胞摄取实验是不是只有在做载抗癌药物时才需要做的呢？若所做的不针对癌细胞，是否可以不做细胞摄取实验呢?

bamboopiggy

这个取决于你要说明什么问题吧？如果你要说明你细胞基因的改变，会影响某种物质的摄取，你当然要做摄取实验啊。

1 回答577 围观

问siRNA导入细胞有哪些方法，哪种最好？

bamboopiggy

1取决于你的实验目的，细胞还是动物2.要看你要导入的是什么细胞？贴壁细胞一般，用化学转染，悬浮细胞用电转的多。生殖细胞用显微注射，动物可以用载体导入。

3 回答665 围观

问同种组织的两种细胞直接共培养

bamboopiggy

贴壁细胞一般用DMEM高糖，悬浮细胞一般用1640，两种细胞直接共培养的培养基可用DMEM高糖，因为DMEM高糖的营养成分比1640多。培养两种细胞的比例需要你做预实验确定，一般从1：1开始，当然你可以评估一下它们在组织中的分布比例。

3 回答2387 围观

问想用荧光显微镜观察病毒感染细胞后的形态，是用普通光学显微镜还是需要荧光显微镜

bamboopiggy

这个要看你的病毒带不带荧光，，如果带荧光，可以用荧光显微镜，顺便还可以看一下转染效率

2 回答4140 围观

问病毒以MOI为1接种细胞，是不是需要提前测TCID50后再计算病毒接种体积

bamboopiggy

MOI是multiplicity of infection的缩写，中文译为感染复数，一般认为MOI是一个比值，没有单位，其隐含的意思是 pfu number/cell,即病毒颗粒数/细胞数。如果你的pfu/ml值为undefined109（9次方），那么1毫升病毒液中有10的9次方个病毒颗粒。如果你知道病毒滴度（pfu/ml）的值，那就简单些啦（因为病毒滴度（pfu/ml）的值得出是比较麻烦的），MOI=（p

2 回答4803 围观

问培养贴壁细胞，例如小肠上皮细胞用胰蛋白酶消化的时间，如何判断？

bamboopiggy

加入胰酶后，润湿一下细胞，然后吸出胰酶，不用吸的太干净。然后镜下观察，细胞变圆了，就可以终止胰酶消化了，容易消化的细胞大概30s-1min，不容易消化的，可以放37度数分钟，主要镜下观察形态改变

2 回答1500 围观

问培养的原代卵巢颗粒细胞支原体污染如何判断？

bamboopiggy

400X看不到支原体的，检测支原体最简单的方法就是取培养液，直接进行pcr检测。

2 回答412 围观

问如何制作简易的小鼠代谢笼

天一湖医者

这个比较详细，参考一下http://www.xjishu.com/zhuanli/01/201821722968.html

1 回答1399 围观

问请问如何确定药物作用于细胞的靶蛋白是什么？脂溶性很差的药物能通过细胞膜吗？

天一湖医者

.高通量筛选的方法用微量滴定之类的方法,看分子能否与已知的蛋白质结合。一般只做计算机算出来的特定蛋白质

1 回答401 围观

问植物外泌体或者细胞外囊泡如何提取蛋白质

bamboopiggy

建议你直接买个外泌体蛋白提取的试剂盒吧，都做到这么个份上了，不怕花钱补充一下：thermo有个kit，可以直接提取外泌体得RNA和蛋白质，说明如下：总外泌体 RNA 和蛋白分离试剂盒设计用于从预分离的或富集外泌体中分离 RNA 和蛋白（未提供）。其适用于 RNA 表达（具体为 miRNA）、处理或功能研究。该试剂盒能够回收相同纯化外泌体制备物中的 RNA 和蛋白。其中一部分样品经过有机提取，然后在

3 回答1896 围观

问各位大神救命！帮我看看这是什么污染？应该如何防治？

bamboopiggy

感觉你还是重新提吧，这个是细胞间常见的真菌污染，感觉很难清除掉。再提的时候，注意无菌操作

3 回答1284 围观

问请问小鼠AWR测定的球囊如何制作

bamboopiggy

自制结直肠扩张球囊 (简称球囊)：一次性保鲜袋用塑封机制成长2 cm，直径0.8 cm，一端封闭的圆柱形球囊，输液导管插入球囊中，导管与开口端用丝线结扎，确保密封不漏气。测量时将球囊插入小鼠肛门，深度为球囊结扎线距肛门括约肌大约0.5 cm处，用胶带轻轻将外端导管固定在小鼠尾巴上，以防球囊在实验过程中滑出。导管通过三通管一端与血压计相连，一端连接注射器。小鼠在实验前12 h禁食不禁水。将小鼠放置在

2 回答1233 围观

问请问怎么研究药物作用于细胞的方式是通过膜表面受体发挥作用还是进入细胞里面的呢？

bamboopiggy

你可不可以在你的药物上加上一个示踪的蛋白，然后confocal照一下就可以。

1 回答1305 围观

问脑细胞提取，如何避免污染

天一湖医者

1、从培养箱取放细胞前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。培养瓶放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。2、操作的时候防护服、口罩、手套缺一不可。操作前，准备好所有实验所需物品，以减少走动，物品需有序摆放在超净台触手可及的地方，同时空留足够操作空间。3、操作时，试剂不用尽量及时盖上盖子，移至操作区外围，尽量不要从开口容器上经过。

3 回答517 围观

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