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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
构建点突变基因载体,突变效率低,有没有好用的酶。
bamboopiggy
好像有个专门做点突变的kit,你可以找找看,如果不行,建议做长引物pcr来做突变点。
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问
求助大佬们,酵母单杂的点板结果不明显,空载和目的基因启动子共转在不同浓度抑制剂的缺陷板上都能长,是表示没有互作吗?谢谢!
汤姆卜丽波
首先确定你的培养基各个组分没有受到蛋白胨,酵母粉等的污染,重新按照上述配方配制MD。然后需要确定你的感受态是不是有问题:分别划板MD,YPD(倒平板时加点氨苄和卡那,防止E.coli的污染。)
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问
qRT-PCR结果的cq值误差多少内可以用?
whilt-shirt
新版的软件都叫Cq值,不叫Ct值了,不必理会。Ct值15-25是最好,10-30之间也接受。如果超过30了,得看一下复孔是否一致,如果一致,也接受。如果不一致,基本就是废的。
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问
请问制备单(多)克隆抗体和制备亚单位疫苗的过程有什么区别呢?可以根据单克隆抗体筛选出来的抗原表位来设计表位疫苗么?
汤姆卜丽波
可以,我们做的是亚单位疫苗,只是亚单位疫苗相当于抗原的功能
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问
10倍溶液稀释到1倍溶液是用水还是生理盐水配啊
whilt-shirt
看你做的实验,如果最终的稀释溶液作用于细胞或者动物或者组织,那就需要用PBS或者生理盐水稀释,如果是用于非生物样本,那一般是用水
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问
配秋水仙素时,用2%的DMSO来溶解。想知道需要加2%DMSO多少?(只用将秋水仙素溶解就行了吗?还是说用2%DMSO来配制?)
未来9
1.0g/L秋水仙素溶液的配制:称取20 mg秋水仙素,加入8.5g/L NaCl溶液20mL,待完全溶解后,经5.516×104Pa,15min高压蒸汽灭菌后避光保存于4度冰箱中。使用时再用DMSO溶解。
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问
qPCR引物设计时,如果primer blast的结果除了目的基因(比如CHS)还有一个预测的CHS基因,那这对引物能用吗
灵枢天问
可以用的,我也有这样的情况,还是可以检测表达的,
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问
4T1细胞溅到眼睛里了,对身体会有伤害么?
balalaLy
应该没什么太大影响,细胞属于外源物质,会被机体免疫细胞解决掉。不放心的话及时做好局部清洗,找眼科医生看看。
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问
求HIF-1α(缺氧诱导因子)对于胶质瘤的具体作用机制
天一湖医者
这个文章写的比较详细,参考一下https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=fb3fa6e6230bebf6527f15e00375c2ec
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问
用细菌基因组如何分析次级代谢产物?
迟C迟
你可能还会用到次级代谢产物预测网址:https://fungismash.secondarymetabolites.org可进行细菌、真菌以及植物次级代谢产物的预测。
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问
怎么用基因组编码结构示意图说明得到的是基因全长
迟C迟
还是得根据发表的文章判断,中间少一段是不是内含子啊,如果是内含子无所谓。还有一个办法,翻译成蛋白序列,看蛋白序列是否完整,就能知道是不是得到基因全长了。
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问
亲和标记法和膜重建法鉴定膜上蛋白质是否为膜转运蛋白的方法?
whilt-shirt
可以选用荧光标记或者His探针试试
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问
活体成像c57灌胃带荧光菌液必须脱毛么?
balalaLy
一般都会剃毛比较好,毛发会带有背景荧光造成干扰。
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问
关于植物悬浮培养的几个问题
bamboopiggy
现在有那种一次性的,细胞滤网,你可以直接买,尽量别用镍网了,反复处理太麻烦。你可以用移液枪吸了细胞,直接抵在滤网上过滤就好。镍网要洗干净后高压灭菌。培养基需要参见参考文献,因为具体不知道你养的什么。看培养瓶的浑浊度。离心留下的细胞多,静置损伤的细胞多,还是要看你的实验目的。你可以把你的组织放到无菌的离心管里称量,然后把组织放到无菌的瓶里后,再称量一下控的离心管,就知道组织重量了微孔滤膜是高压蒸汽灭
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问
请高手帮忙看下小鼠主动脉瓣Masson染色如何计算胶原百分比,图中圈出的部分属于主动脉瓣还是心脏?谢谢🙏
汤姆卜丽波
是心脏啊。下面那部分才是主动脉瓣
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问
细胞膜上有很多蛋白质,如何鉴定膜转运蛋白?(亲和标记 膜重建)
whilt-shirt
可以采用荧光标记或者His探针试试
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问
在质粒的双酶切以及回收中,为什么DNA的甲基化程度会影响核酸限制性内切酶的活性?
未来9
DNA甲基化以后,就不再被限制性内切酶识别和切割。
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问
用Heochst33342直接染色如何看细胞是否发生凋亡
bamboopiggy
图二发生凋亡,Heochst33342染色后,直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时,会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染
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问
PDB序列氨基酸残基和末端修饰
bamboopiggy
lol,如果二楼可以的话,您也可以参考一下这个帖子:https://www.novopro.cn/articles/201804241174.html
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问
基因转录时两条链均可作为模板链吗?转录过程需要注意什么?
天一湖医者
DNA的两条链不能同时作为转录的模板链。
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