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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
请问各位实验大神,用cck8单纯的测细胞增值实验,数据怎么分析,可以直接用OD值作图吗
balalaLy
一般是以对照组的OD值为1转化为相对值进行做图
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问
红色荧光蛋白质粒转hek293t不亮怎么办
bamboopiggy
可能是你质粒构建有问题,尤其是diRed,容易产生移码,先检查质粒,如果没有问题,可以进行流式分选后,再做。
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问
近交系C57如何快速大量繁殖
bamboopiggy
怎么繁殖,超过10代,总会产生遗传漂变。如果10代以内,可以直接雌雄合笼,得到想要的鼠。
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问
我想敲掉一个基因,过表达另一个基因,是找公司给我做质粒转染进细胞么?
bamboopiggy
你想自己做也可以啊,找公司也行,看你的经费情况。
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问
设计引物时怎么保留完整的cds区
bamboopiggy
如果要保留完整的cds区,可以保护碱基+酶切位点+cds的start code开始的那一块,保护碱基+酶切位点+cds区的stop code 往前的一段,来设计引物。
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问
请问细菌浓度用什么方法测定比较好,如何测定?
bamboopiggy
如果你是要数菌的量的话,建议用细胞计数板来计数,OD值只是一个相对值,在0.6-0.8时,菌的状态最好。
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问
定量pcr时 重复性不好,我应该从哪些方面找原因呢?
天一湖医者
主要是加样要特别仔细,比如打出液体时确定打完,移走枪头时不要粘附液体。加样完成后顺时离心,保证液体都在底部。pcr管选择质量选择很重要,次品不可以做定量。因为它的均一度不够。
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问
建立过敏性鼻炎小鼠模型时,年龄选择有什么依据(详细)?不到年龄或者过了年龄有什么影响?
天一湖医者
年龄选择一般为6-7周,具体可以参考https://wenku.baidu.com/view/34d604dd0a75f46527d3240c844769eae009a324?bfetype=new
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问
PCR扩增后。没有条带是怎么回事
bamboopiggy
1.引物没有加全,2,酶坏了,3,模板没有加,4,引物特异性不好。5,pcr仪坏了。
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问
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因一般是什么呢
天一湖医者
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有:①必要时重新设计引物;②减低酶量或调换另一
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问
pcr产物电泳会有气溶胶污染吗,怎么解决呢
天一湖医者
pcr产物电泳会有气溶胶污染。PCR产物污染的形式是气溶胶污染。在空气与液体面摩 擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样 枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝,因而由 其造成的污染是一个值得特别重视的问题.
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问
请问需要做浓度梯度还是单一浓度呢?
bamboopiggy
可以分成正常组 造模+安慰剂组 造模+阳性对照组 造模+试验药组,只要有明显差异,没必要非要做三个组。
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问
crispr文库,检测gRNA慢病毒文库插入细胞基因组的情况,使用的是哪对PCR引物?
滴滴胸外小张
如果是购买addgene的文库,可以在网站上找到protocol,里面有写用哪些引物去进行二代测序建库。
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求助:摇好的菌离心收集后可以放-20度冰箱,过几天再超声裂解菌体提蛋白吗
汤姆卜丽波
我们这样做过,最好是放-80,
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问
请问,谁做过fitc-dextran的细胞通透性实验,求实验方法与步骤
未来9
可以参照这篇硕士论文《基于PI3K-AKT通路探讨泽泻醇A改善脑微血管内皮细胞氧糖剥夺损伤的机制研究》和博士论文《LIPUS联合SonoVue对肾小球内皮细胞的影响及机制研究》通透性检测方法步骤如下:将细胞接种于含0.4 um 孔聚碳酸酯膜的6.5 mm Transwell小室,培养Sd至细胞融合,进行OGD 处理,再予以不同含药培养基复氧,CO2继续培养24 h。然后将上室培养基更换为含20 u
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如何确定动物实验的给药浓度?
bamboopiggy
1.你可以咨询买药的公司,问他们的推荐剂量2.做预实验,确定范围3.那在写文章时需要提供这个预实验资料吗?这个要看你投什么方向的杂志,如果是药物研究的,可能会问你。4.你只要围绕抗炎作用展开就可以,因为别人都没有在眼部用过这个药,你也只是看它的抗炎作用,并且不同公司产的药,会有浓度差的
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请问酵母单杂自激活确定抑制剂浓度之后,在点对点验证中目的基因启动子和AD空载组合还会长斑点吗?
天一湖医者
酵母单杂自激活确定抑制剂浓度之后,在点对点验证中目的基因启动子和AD空载组合会长斑点。
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为什么血型糖蛋白SDS-PAGE电泳时跑得慢?
bamboopiggy
糖基化会影响糖蛋白的预期大小,从而导致其再SDS-PAGE胶中的位置与分子量不一致。血型糖蛋白30000分子量,而红细胞带3蛋白分子量约 95,000~100.00,但是由于糖基化的存在,使得血型糖蛋白的电荷/摩擦系数与带3蛋白接近,所以出现在带3蛋白附近。
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瑞芬太尼可以连续应用多长时间?
天一湖医者
瑞芬太尼可以连续应用不建议超过14天。
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问
请教一下大家,医院药学实验室做血药浓度,使用的是荧光层析法,有什么实验室建设及人员资质的硬性要求么?
天一湖医者
实验室管理者应确保所有操作专门设备、从事检测和/或校准、评价结果、签署检测报告和校准证书的人员的能力。当使用在培员工时,应对其安排适当的监督。对从事特定工作的人员,应按要求根据相应的教育、培训、经验和/或可证明的技能进行资格确认。
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