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        小鼠小肠固有层淋巴细胞提取细胞量都很少,综合了很多文献中的方法,细胞量依然达不到?求大家的建议。

        user-title

        dxy_gy7crym8

        关键步骤如下:冲洗小肠,纵向剖开,清洗干净,刮绒毛,清洗干净,剪成0.5cm的肠段,离心管中清洗。上皮细胞消化液为10mM EDTA的PBS(会37°预热),37℃ 220r/min消化20分钟,用力甩3次,100μm过滤3次,洗至澄清。固有层消化液为300U/ml的2型胶原酶(赛默飞)和0.08U/ml的2型dispase (罗氏),一般消化液总体积用20ml(会37°预热)。肠段剪碎放入消化液中220r/min消化30分钟,用力甩,40μm过滤,500XG离心5分钟。清洗过程全程为预冷undefinedPBS。大家觉得我哪一步有问题,我自己探索了一个多学期,还是找不到问题所在,最后离心沉淀不实,一拿就飘起来。

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        3 个回答

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        秋秋欣欣

        有帮助

        消化液要用不含钙离子的,均匀缓慢加入

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        有可能消化的不好然后过滤的时候细胞没能穿过滤网

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        你试一下离心的时候,离一次吸出一点上清,然后再离心。重复操作直到上清吸完,余下细胞

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