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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
wb实验,应什么软件可以分析不同蛋白的表达情况?
balalaLy
一般用imageJ软件,直接网络搜索,有非安装版,非常好用
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问
wb实验过程,想分析蛋白蛋白的表达情况,上样体积是否一致?
balalaLy
上样体积要求尽量一致,是为了保证每个孔在跑的过程中压力一致。不然隔壁孔的蛋白会往旁边体积少的地方歪。
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问
流式分析细胞凋亡实验中如果消化贴壁细胞前用PBS清洗,那不是把凋亡细胞都洗掉了吗
我不是药神88
流式处理细胞的时候,pbs要轻柔冲洗细胞1次,目的是为了去掉培养液(含血清的),以防止血清终止胰脢的消化;这之前倾倒培养液之后,用pbs处理1次细胞,并不会对起产生特别大影响,注意不要用枪头直接吹打细胞,这样基本上不会影响实验结果。过度吹打细胞会造成细胞机械性死亡。
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问
质粒转染,PEI的用量与细胞数有关,还是与质粒数有关?PEI的量不能超过多少?
bamboopiggy
和质粒的量有关,和细胞的数目也有关,一般细胞融合度到50%-60%开始做转染,按照不同的比例如1:2-1:8的比例来配转染试剂。
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问
质粒转染中,在不对细胞活率影响下,平均单个细胞能承受多少拷贝质粒,或多少质量的质粒?
汤姆卜丽波
一般单个细胞根据质粒的大小来看,转染效率比较好的话可以接受2-3个,差不多的话基本一对一
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问
质粒导入载体失败咋办?
天一湖医者
排查问题的话,先查酶有没有问题(连接酶连别的片段和载体试试看,还有酶切产物纯化后直接转化看长多少菌落来判断酶切是否成功),然后插入片段可以用TA克隆去测序看是不是PCR成功。
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问
求助:蛋白重组表达
bamboopiggy
先确定你蛋白表达载体确实构建成功,然后再重新挑个菌试试,可以加大一下菌液的量
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问
PCR混检电泳阴性正常无条带,但单检电泳阴性出现和阳性相同位置的条带,向高手请教?
汤姆卜丽波
混检的时候模板量混在一起每个都不高,通过扩增,假阴性结果很容易出现的。
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问
大体系PEI转染293S细胞,细胞1.undefined10^6/ml,质粒与PEI比例为1:4,第二天细胞过滤下降,是什么原因呢?有做过的吗
bamboopiggy
293S细胞是被驯化成能够悬浮培养且能够耐受低钙离子培养条件的293细胞系。你可以靠过梯度做质粒与pei的浓度比例:从1:2到1:8
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问
户外核酸检测时,室外温度较高,是否需要给试剂降温存放,最长存放多长时间不会影响检测结果?
汤姆卜丽波
最好低温存放,一般24小时之内不影响检测结果
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问
将目的基因通过BP反应构到中间载体中,菌P检测电泳条带大小正确,但是提质粒后跑电泳,质粒的条带大小不对,请问为什么啊?
汤姆卜丽波
可能菌液pcr.出现了假阳性,提质粒出来是空载体
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问
药品稳定性过程杂质超标,处方如何调整
天一湖医者
药品稳定性过程杂质超标,最好进行质控。如目前不做,则需进行研究,给出解释。并做好进行质控准备。处方可以根据情况进行同类药物调整。
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问
咽拭子试剂撒出,是不是整换都要重新采集?
未来9
不一定,要看洒落后剩余试剂的量够不够PCR检测的要求
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问
咽拭子采集以后要在多长时间之内检测?对温度有什么要求吗?
天一湖医者
在24小时内检测的话,4度保存就可以了,24小时外采集,0度保存。
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问
小鼠小肠固有层淋巴细胞提取细胞量都很少,综合了很多文献中的方法,细胞量依然达不到?求大家的建议。
秋秋欣欣
消化液要用不含钙离子的,均匀缓慢加入
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问
双荧光素酶的酶标仪使用
bamboopiggy
你要看你用的是那个厂家的仪器啊,这个一般第一次做,可以咨询平台的老师,或者找个做过的人带着你做,别自己去乱鼓捣。
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问
做蛋白组学Prm样本要设定几个重复,重复数在结果中怎么体现?重复数会影响审稿吗
balalaLy
至少3个,重复数体现在统计数据的bar值
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问
K599发根农杆菌注射大豆子叶,为什么只长愈伤不长根
dxy_g9y5gije
首先考虑植物激素使用问题,植物组织培养过程中,植物激素的使用顺序及比例都会影响结果,植物组织培养过程中,若只分裂而不分化出芽和根,其可能原因是细胞分裂素和生长素配比不对,你查查文献,看看人家都激素使用
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问
四联抗生素C57伪无菌小鼠构建
bamboopiggy
看参考文献,有人用的是灌胃的方法,你如果要小鼠喝的话,建议每天换液,因为抗生素也有个降解的时间啊。
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问
有使用APAP导致AML12 造模肝损伤的大神没?
汤姆卜丽波
体内外实验都有见过用APAP诱导急性肝损伤的,是可以的AML21和G2都可以
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