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科研学霸天团,48小时有问必答
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SOC培养基已经混合好的粉末如何灭菌
dxy_gwrp7ndq
可以用0.22um滤器过滤除菌。
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问
跑WB的时候 内参总是特别粗 还喜欢连在一起 请问怎么回事?
bamboopiggy
降低内参的抗体的浓度,以及二抗的浓度
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问
请问在做植物细胞悬浮培养时(百合),如果要将愈伤组织分散,所用的酶有哪些,对应的用量是多少呀?浓度和用量之类的。
迟C迟
用果胶酶和纤维素酶。称取25mg蛋白酶粉配制成25ml酶溶液,每次用100-200微升就可以。
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问
做完转录组学后,必须要做q-pcT昨做验证吗
迟C迟
看文献吧,一般需要再次用qPCR验证一下公司做的转录组数据准不准确的。
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问
慢病毒细胞稳转时间多久最好?
天一湖医者
慢病毒细胞稳转时间16-18小时最好
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问
构建质粒时,什么标签可以防止包涵体的形成?
bamboopiggy
重组基因在表达宿主中表达量过高或合成速度过快,以至于没有足够的时间进行折叠,二硫键不能正确配对,导致蛋白以包涵体的形式存在。所以你要调整你摇菌的速度和温度
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问
用大肠杆菌纯化蛋白时出现包涵体怎么办?
迟C迟
可以用尿素(8M-10M):尿素溶解不电离,呈中性,成本低,蛋白复性后除去不会造成大量蛋白沉淀;溶解后的包涵体可选用多种色谱方法纯化。 或者用盐酸胍(6M-8M):溶解能力强,高达95%以上的溶解作用。
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问
盐酸羟胺和哌嗪乙酸乙酯的反应条件不好摸索,有没有做过类似反应的大佬。
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问
沙眼衣原体感染细胞的实验需要在什么等级的实验室进行啊?
天一湖医者
沙眼衣原体感染细胞的实验需要在二级的实验室进行。
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问
求助,结晶紫染色后测完吸光度得到值后怎么计算啊
bamboopiggy
从板上每个孔的平均吸光度中减去没有细胞的孔的平均吸光度以减去背景. 然后再拿实验组和你的对照组比就好了。
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问
结直肠癌转染
秋秋欣欣
220-300V都可以,或者就用脂质体转染
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问
求助:流式单标峰形奇怪
天一湖医者
有可能是本身就是很多峰构成的,但由于制备液相上所连接的制备柱的规格或者进样的浓度大等因素导致峰与峰之间分离度降低,进而形成了一个单峰,而制备出来,再经分析液相检测时,原来单峰中所包含的那些峰就显现出来了;或者是在制备后回收的过程中,受热或者光照等因素的影响,导致化合物变性或者降解,也会出现这种情况。如果是前者,那么可以降低样品浓度或者调整流动相的比例,使峰得到很好的分离,也可以试试不同填料的色谱柱
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问
想知道同源重组对于链霉菌有什么特殊需要注意的吗
府宅
用硫链丝菌素抗性基因作为筛选标记,可以简单直接地获得可能发生同源重组的菌株,以便进一步从分子水平上用杂交进行验证
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问
请问大家有做过原生质体实验的大佬呀
迟C迟
我们实验室常做水稻和大麦原生质体,欢迎来问具体实验细节。
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问
小鼠脑部小胶质细胞免疫荧光
bamboopiggy
我看着你这个图可以,你可以参考一下人家文献里的图片,或者是你选的位置改改
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问
PEI转染293T细胞和293S细胞,转染效率差异大吗?有了解293S大规模转染条件的吗?
灵枢天问
293T 和293S转染效率差异不大,都属于相对好转染的细胞,转染条件就是看你用的转染试剂了,根据你的试剂说明书来
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问
想问一下,在wb时,配制5%的脱脂奶粉,有的用pbst稀释有的人用tbst稀释,两个缓冲液有什么区别吗?
bamboopiggy
都是缓冲液,问题不大,我 喜欢用pbst,因为不需要调ph值,tbst是需要调ph值得,但是有人说tbst对磷酸化得蛋白好。
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问
请问pcrtargeting的bt340是什么的原理
汤姆卜丽波
BT340是一种温敏型质粒,在42℃高温诱导下质粒 BT340 可以表达 FLP 重组酶,FLP 重组酶可以识别质粒中安普抗性框两侧的 FRT 序列,将 FRT 之间的抗性基因敲除,在此过程中质粒 BT340 消失,之后原基因插入抗性基因的部分仅剩下 81bp 的 scar 序列 FRT 序列经 FLP酶切除后剩余的部分序列),所得即为原基因内部被敲除的重组质粒 。
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问
基因测序结果有两个碱基突变,还可以用吗
府宅
如果是表达的话,只要氨基酸序列没有改变,接下来的实验还是可以继续的,如果在其他区域,如果此位点不是你的核心区域,个人认为影响不大。
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问
小鼠造模打完肿瘤细胞后量瘤子忽大忽小,什么原因?
汤姆卜丽波
可能是种的时候引发了炎症,一直在炎症反应,不断的反复吸收
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