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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
biolegend的Fixation Buffer可否用于表面染色后的细胞保存?
bamboopiggy
paraformaldehyde 是多聚甲醛,如果你的biolegend的fixation buffer成分也是多聚甲醛,可以用的
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问
Pcrtargeting切除抗生素是电转进Bt340后在37度完成筛选吗?然后在42度过夜诱导吗
府宅
37度培养筛选,42度热击90秒
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问
ImageJ连续处理图片,每张图都需要Calibrate吗?
bamboopiggy
需要啊,因为每张图的底色可能都不一样
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问
植物CP蛋白的单抗感觉特异性不是很强,能跑出来很多带,请问这是正常现象吗,如何解决?
dxy_gwrp7ndq
如果实在没有更好的抗体,建议采用阴性对照和阳性对照来确定上述哪个条带是目的条带。
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问
各位老师,请问动物实验生化指标中的SOD和MDA的数据是不应该反着来,会不会有这两个指标同时升高或同时降低的情况
dxy_gwrp7ndq
SOD 和MDA,一个是清除超氧自由基的酶,一个是指膜过氧化程度。保护指标和损伤指标不会同高或同低
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问
SOC培养基已经混合好的粉末如何灭菌
dxy_gwrp7ndq
可以用0.22um滤器过滤除菌。
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问
跑WB的时候 内参总是特别粗 还喜欢连在一起 请问怎么回事?
bamboopiggy
降低内参的抗体的浓度,以及二抗的浓度
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问
请问在做植物细胞悬浮培养时(百合),如果要将愈伤组织分散,所用的酶有哪些,对应的用量是多少呀?浓度和用量之类的。
迟C迟
用果胶酶和纤维素酶。称取25mg蛋白酶粉配制成25ml酶溶液,每次用100-200微升就可以。
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问
做完转录组学后,必须要做q-pcT昨做验证吗
迟C迟
看文献吧,一般需要再次用qPCR验证一下公司做的转录组数据准不准确的。
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问
慢病毒细胞稳转时间多久最好?
天一湖医者
慢病毒细胞稳转时间16-18小时最好
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问
构建质粒时,什么标签可以防止包涵体的形成?
bamboopiggy
重组基因在表达宿主中表达量过高或合成速度过快,以至于没有足够的时间进行折叠,二硫键不能正确配对,导致蛋白以包涵体的形式存在。所以你要调整你摇菌的速度和温度
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问
用大肠杆菌纯化蛋白时出现包涵体怎么办?
迟C迟
可以用尿素(8M-10M):尿素溶解不电离,呈中性,成本低,蛋白复性后除去不会造成大量蛋白沉淀;溶解后的包涵体可选用多种色谱方法纯化。 或者用盐酸胍(6M-8M):溶解能力强,高达95%以上的溶解作用。
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问
盐酸羟胺和哌嗪乙酸乙酯的反应条件不好摸索,有没有做过类似反应的大佬。
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问
沙眼衣原体感染细胞的实验需要在什么等级的实验室进行啊?
天一湖医者
沙眼衣原体感染细胞的实验需要在二级的实验室进行。
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问
求助,结晶紫染色后测完吸光度得到值后怎么计算啊
bamboopiggy
从板上每个孔的平均吸光度中减去没有细胞的孔的平均吸光度以减去背景. 然后再拿实验组和你的对照组比就好了。
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问
结直肠癌转染
秋秋欣欣
220-300V都可以,或者就用脂质体转染
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问
求助:流式单标峰形奇怪
天一湖医者
有可能是本身就是很多峰构成的,但由于制备液相上所连接的制备柱的规格或者进样的浓度大等因素导致峰与峰之间分离度降低,进而形成了一个单峰,而制备出来,再经分析液相检测时,原来单峰中所包含的那些峰就显现出来了;或者是在制备后回收的过程中,受热或者光照等因素的影响,导致化合物变性或者降解,也会出现这种情况。如果是前者,那么可以降低样品浓度或者调整流动相的比例,使峰得到很好的分离,也可以试试不同填料的色谱柱
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问
想知道同源重组对于链霉菌有什么特殊需要注意的吗
府宅
用硫链丝菌素抗性基因作为筛选标记,可以简单直接地获得可能发生同源重组的菌株,以便进一步从分子水平上用杂交进行验证
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问
请问大家有做过原生质体实验的大佬呀
迟C迟
我们实验室常做水稻和大麦原生质体,欢迎来问具体实验细节。
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问
小鼠脑部小胶质细胞免疫荧光
bamboopiggy
我看着你这个图可以,你可以参考一下人家文献里的图片,或者是你选的位置改改
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