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科研学霸天团,48小时有问必答
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探针法荧光PCR可以同时扩增3kb和2kb的基因吗
灵枢天问
可以是可以的,但是后续产物需要跑胶纯化
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问
his标签的蛋白过柱子,洗脱不下来,洗脱液咪唑浓度已经达到0.5M。
灵枢天问
如果不好洗的话,那就得再加一点咪唑,我们可以提到0.8
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问
求助!!!嘌呤霉素筛选THP-1最适浓度预实验,为什么细胞达不到90%的死亡率?
灵枢天问
这个程度的死亡率有可能再加一点就上去了,再细分一下浓度
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问
相差1KB的基因可以PCR同时扩增吗
bamboopiggy
相差1kb的基因可以用pcr同时扩增,只要你的TM值相差不大,另外,跑realtime pcr,不在于基因的长度,而在于你pcr产物的长度
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问
溴酚蓝在电泳时有可能分离为3个条带吗?
灵枢天问
可能是配的太久了,成分分层了,没事不影响结果
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问
明胶酶谱法
Dr_劉医生
NP40可以用,属于温和的细胞组织裂解液;MMP-9检测用一般的化学细胞裂解液就可以,没什么特别的,常用的trizol裂解液;
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问
求助 sd新生大鼠腹腔注射lps
Dr_劉医生
不需要补充注射,那是说明小鼠炎症模型没有造模成功;可能是你的浓度太低了,一般脂多糖LPS诱导炎症模型都是尾静脉注射10mg/kg的LPS溶液
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问
实验求助
Dr_劉医生
最常用的就是电转化,给你附上protocol供参考,但我建议你按照文献和试剂盒的细节具体操作。实验试剂:GM:LB+0.5M 山梨醇。ETM:0.5M山梨醇,0.5M甘露醇,10%甘油。RM:LB+0.5M山梨醇+0.38甘露醇电转仪:Bio-Rad的gene-pulser方法:1)新鲜平板挑单菌落(小一点为好)接种于5mlLB培养基中,过夜培养.。 2)测量摇管内OD,控制好接种量,使接种完毕后
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问
如果做抗凋亡的动物体内模型的话,需要多少天之后取材呢,一周吗?
Dr_劉医生
只做组织水平,可以一周内取材;如果还要做细胞水平的抗凋亡作用,建议48h内,不超过72h,
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问
质粒测序只有单侧引物成功,另一侧引物失败,但pcr可以p出条带
Dr_劉医生
更多是引物设计的问题,3‘或5’单侧符合碱基配对能扩增。跑出条带只是说明表达了,不能说明引物的特异性
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问
细胞MDA检测时要裂解多久呢?
土井挞克树
一般细胞裂解10min就可以离心取上清了
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问
pulldown,IP实验
土井挞克树
祛除非特异性杂质,不然非特异性吸附会严重影响后续实验
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问
营养缺陷型酵母筛选失效
土井挞克树
你尝试用紫外线,或者化学试剂处理一下。
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问
信号通路
麻黄连翘赤小豆
可以查阅网药一类的文献进行综合挑选,靶点也要看测序的结果,哪个基因组表达特别明显
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问
溶剂乙二醇甲醚怎么除
此用户已注销
采用共沸蒸馏的方法就可以把水提取出来了.
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问
graphpadprism 怎么把柱状图的对照组数值都变成1呀
lanlvmaomao
菜单栏的下拉选项中 可以设置y轴对照组的值为1。
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问
大肠杆菌OD600nm值对应的细菌数量
你好几和户
一般OD600=1时对应的细菌浓度为undefined10^9cfu/ml
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问
如何从牛奶中的酪蛋白分别获得βαK酪蛋白
你好几和户
包括以下步骤:步骤1、将从牛乳中提取出来的酪蛋白粗品,加入尿素溶液中,碱液调节ph值为9-10,升温至40-45℃,搅拌溶解,然后常温下搅拌2-3h后降温至2-6℃,静置1-2h。步骤2、冰水浴条件下,用酸液调节步骤1得到的物料ph至5.0±0.2,离心收集沉淀,纯水洗沉淀至少一次,得到第一沉淀物。步骤3、取适量ph值为11±0.2的碱液,升温至40-45℃之间,加入步骤2得到的第一沉淀物,搅拌溶
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问
miRNA转染RSC96细胞
土井挞克树
可以参考刘玉璞的《。 三种转染试剂对RSC96细胞miRNA转染效率及细胞毒性影响的比较》
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问
外泌体浓度
土井挞克树
我们实验室的是这样做的,提取后的外泌体用PBS重悬,取50ul,直接加入20-30ul的RIRP-PMSF(100:1)裂解液,其余步骤同裂解细胞测蛋白一样。上机测蛋白浓度的时候,可以不加up水(或PBS)稀释十倍,而是直接加20ul的裂解上清,否则可能会浓度太低测不出
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