实验问答22,900,321 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问碧云天的茜

土井挞克树

c0148是专门检测成骨细胞的，c0138检测干细胞显色好

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问求助：小鼠MCAO模型

土井挞克树

1.选用柔韧度合适的线栓2.选择线栓型号要与老鼠体重相配。每个地区的老鼠有差异，所以要做预实验，根据预实验结果来选择合适型号线栓。3.插破的情况下，也可以根据插破点来找到合适型号线栓。

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问Transwell小室侵袭与共培养问题

土井挞克树

可以共同培养，自己收的细胞要放在上室。

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问如何检测标本中某基因或蛋白的含量

土井挞克树

可以做rt-pcr，来检测rna的含量。然后做qpcr来定量分析rna

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问观察拟南芥的表型，其中要求计算拟南芥的萌发率，那在一天的什么时候数拟南芥的萌发数最好呢，还是一天多数几次，分早中晚

sswei

拟南芥在发芽过程中，它要求合适的温度（22-23℃）、光照、光周期、湿度。并且要求打破休眠。上述影响因素中，光照和湿度是2个必需的条件。在种子发芽的过程中，如果种子被土壤遮盖而不能见到阳光则种子不能发芽。所以，在计萌发数时宜白天为佳，每天白天固定时间数3次。

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问求问大神角膜上皮细胞怎么提取，培养？

土井挞克树

培养基：无血清角质形成细胞培养液，添加0.15mmol/L 钙、0.1ng/ml 人上皮生长因子、5mg/ml 胰岛素、0.5mg/ml 氢化可的松和30mg/ml 牛垂体提取物；MEM；PBSA；胎牛血清

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问降解TLR4实验所用的LPS刺激时长大家都是多久？然后孵育PROTAC时长又是多久？

土井挞克树

lps一般的刺激时长为3-5h。

3 回答1482 围观

问请问牙龈卟啉单胞菌的浓度与od值关系？

sswei

一般OD600=1时对应的细菌浓度为undefined10^9cfu/ml。

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问分子克隆测序都是载体的的序列？

土井挞克树

说明载体没连接或者载体脱离了，需要重新连接

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问实验中用到的buffer的配置详细是什么试剂进行配置，以及蛋白含量和对应磁珠用量的具体比例是什么？

土井挞克树

buffer的配置有很多种方法，可以参考下表

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问一个基因有三个转录变体，克隆基因时会对测序结果造成影响吗，影响克隆基因吗

huarenqiang5

一个基因有三个转录变体时可以用以下两种方法进行基因测序： 1.设计CDS引物，通过提取组织RNA，并设计相应引物，运用PCR的方法获得目的基因CDS序列，连接到克隆载体后，挑取单克隆进行测序。这种方法相对成本较低，但是PCR过程可能引入突变。适合基因CDS序列较短的情况。 2.全基因合成：根据目的基因的CDS序列，直接交给公司设计合成目的基因。此方法优点准确

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问小鼠腹部皮肤缝合后缝线被咬掉有什么办法，需要再次补缝合好么？再次缝合需要再次麻醉么？

Ckkdien

防止小鼠撕咬缝线目前最好用的是实验鼠专用伊丽莎白圈，参考文献中mice were housed individually and fitted with Elizabethan Collars（E-collars）（Kent Scientific Corporation）to prevent bitinf of sutures.国内也有生产的，网上有佩戴方法的视频教学。最好是再次麻醉后补缝合。

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问根系泌氧（rol）具体测定方法

sswei

柠檬酸钛液体的制备方法，包括以下步骤：S1.烧杯中加入蒸馏水，将柠檬酸倒入烧杯中，并同时搅拌，至柠檬酸完全溶解，再向该溶液中滴加四氯化钛盐酸溶液，同时搅拌，保持烧杯内的温度在25℃，连续搅拌20分钟；S2.向S1中的烧杯内加入氯化铁，搅拌2分钟后加入氯化锌，再次搅拌2分钟后加入二氧化锰，再搅拌2分钟后加入硼酸，搅拌2分钟；S3.向配置好的溶液内缓慢加入乙醇，搅拌，不定时的使用pH剂检测溶液的

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问薄膜水化法制备聚合物囊泡，在水化过程有絮状物析出，有什么解决办法吗？

sswei

生成成沉淀原因大约是因为甲醛与聚乙烯醇发生分子间的缩醛反应，使原本线性的聚乙烯醇变成T型交联，分子量变大而沉淀出来，而缩醛，办缩醛的反应是可逆的，并不稳定。只有相邻的两个羟基与甲醛形成的五元环状缩醛才稳定，而这样的产物是线性的，加上众多的羟基，醚键都是亲水基，溶水性好。因此，析出的沉淀会逐渐解去不稳定的T型交联，变成线性的，相邻五元环的可溶性聚合物，又会溶解。

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问小鼠蔗糖饮水实验瓶子漏水怎么办呀

sswei

糖水偏好测试过程中偶尔会存在饮水瓶漏水的现象，这种情况有可能是实验员操作失误，有可能是饮水瓶位置放置不正确，也有可能是动物舔水过程中无意泄漏的，这些现象很多时候可能会导致在规定时间内获取的动物舔水摄入量差异不明显（动物单次饮水量本就很有限），这个时候用户可以选择糖水偏好测试仪的计算出的动物舔水次数、饮水时间、舔水频率等数据来参考统计，或许是另一条评估的好思路。最重要的是在正常实验前一定要检查好水瓶

4 回答739 围观

问请问如果我的细胞需要经过刺激之后给药，那么在小室接种细胞时，这个细胞是给药和刺激完成后再接种到小室中

loveliufudan

这取决于你的实验设计和研究目的。如果你的目的是研究给药和刺激后细胞的生物学响应，那么你需要先刺激和给药，然后将细胞接种到小室中进行观察。如果你的目的是研究细胞在给定条件下的反应，那么你可以先将细胞接种到小室中，然后进行刺激和给药。在任何情况下，你需要注意细胞的状态和实验条件，以保证实验结果的可靠性。

4 回答216 围观

问苏木素复染过程中，如果染色不理想可以补救吗？怎么补救？

huarenqiang5

能够进行补救，染色深则分化时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。

4 回答987 围观

问实验过程中，切片上有一些空余的地方会非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性，怎么才能避免这种情况？

huarenqiang5

进行封闭后然后再进行一抗孵育这样可以有效避免假阳性的发生。

5 回答219 围观

问实验过程中，石蜡切片染色过程中总是出现脱片现象，怎么有效避免？

huarenqiang5

一般来说，如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话，如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。可以试试一下的方法：a.我们一般用APES：丙酮=1:50的处理液来处理片子，处理5min左右，然后水洗，烘干既可用于贴片。如果把水滴再处理好的片子上，水比较聚的话说明片子处理的好。b.贴片子的时候，展片的时间要把握好，不要太长，否则不利于贴牢。c.烤片子也

6 回答1881 围观

问求问大鼠CD4+T细胞体外培养必须用人白介素2吗，大鼠白介素2行不行，一般具体加多少呢？

sswei

4 回答468 围观

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