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科研学霸天团，48小时有问必答

问小鼠腹部皮肤缝合后缝线被咬掉有什么办法，需要再次补缝合好么？再次缝合需要再次麻醉么？

Ckkdien

防止小鼠撕咬缝线目前最好用的是实验鼠专用伊丽莎白圈，参考文献中mice were housed individually and fitted with Elizabethan Collars（E-collars）（Kent Scientific Corporation）to prevent bitinf of sutures.国内也有生产的，网上有佩戴方法的视频教学。最好是再次麻醉后补缝合。

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问根系泌氧（rol）具体测定方法

sswei

柠檬酸钛液体的制备方法，包括以下步骤：S1.烧杯中加入蒸馏水，将柠檬酸倒入烧杯中，并同时搅拌，至柠檬酸完全溶解，再向该溶液中滴加四氯化钛盐酸溶液，同时搅拌，保持烧杯内的温度在25℃，连续搅拌20分钟；S2.向S1中的烧杯内加入氯化铁，搅拌2分钟后加入氯化锌，再次搅拌2分钟后加入二氧化锰，再搅拌2分钟后加入硼酸，搅拌2分钟；S3.向配置好的溶液内缓慢加入乙醇，搅拌，不定时的使用pH剂检测溶液的

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问薄膜水化法制备聚合物囊泡，在水化过程有絮状物析出，有什么解决办法吗？

sswei

生成成沉淀原因大约是因为甲醛与聚乙烯醇发生分子间的缩醛反应，使原本线性的聚乙烯醇变成T型交联，分子量变大而沉淀出来，而缩醛，办缩醛的反应是可逆的，并不稳定。只有相邻的两个羟基与甲醛形成的五元环状缩醛才稳定，而这样的产物是线性的，加上众多的羟基，醚键都是亲水基，溶水性好。因此，析出的沉淀会逐渐解去不稳定的T型交联，变成线性的，相邻五元环的可溶性聚合物，又会溶解。

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问小鼠蔗糖饮水实验瓶子漏水怎么办呀

sswei

糖水偏好测试过程中偶尔会存在饮水瓶漏水的现象，这种情况有可能是实验员操作失误，有可能是饮水瓶位置放置不正确，也有可能是动物舔水过程中无意泄漏的，这些现象很多时候可能会导致在规定时间内获取的动物舔水摄入量差异不明显（动物单次饮水量本就很有限），这个时候用户可以选择糖水偏好测试仪的计算出的动物舔水次数、饮水时间、舔水频率等数据来参考统计，或许是另一条评估的好思路。最重要的是在正常实验前一定要检查好水瓶

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问请问如果我的细胞需要经过刺激之后给药，那么在小室接种细胞时，这个细胞是给药和刺激完成后再接种到小室中

loveliufudan

这取决于你的实验设计和研究目的。如果你的目的是研究给药和刺激后细胞的生物学响应，那么你需要先刺激和给药，然后将细胞接种到小室中进行观察。如果你的目的是研究细胞在给定条件下的反应，那么你可以先将细胞接种到小室中，然后进行刺激和给药。在任何情况下，你需要注意细胞的状态和实验条件，以保证实验结果的可靠性。

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问苏木素复染过程中，如果染色不理想可以补救吗？怎么补救？

huarenqiang5

能够进行补救，染色深则分化时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。

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问实验过程中，切片上有一些空余的地方会非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性，怎么才能避免这种情况？

huarenqiang5

进行封闭后然后再进行一抗孵育这样可以有效避免假阳性的发生。

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问实验过程中，石蜡切片染色过程中总是出现脱片现象，怎么有效避免？

huarenqiang5

一般来说，如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话，如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。可以试试一下的方法：a.我们一般用APES：丙酮=1:50的处理液来处理片子，处理5min左右，然后水洗，烘干既可用于贴片。如果把水滴再处理好的片子上，水比较聚的话说明片子处理的好。b.贴片子的时候，展片的时间要把握好，不要太长，否则不利于贴牢。c.烤片子也

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问求问大鼠CD4+T细胞体外培养必须用人白介素2吗，大鼠白介素2行不行，一般具体加多少呢？

sswei

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问药品的防霉实验怎么做

土井挞克树

孢子悬液可以直接接种在PDA平板上实验

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问蛋白对接Zdock中蛋白过大问题

huarenqiang5

蛋白大分子按以下步骤进行预处理：1 在执行vina分子对接过程中，主要的预处理软件事Autodock tools这个软件，前面我们已经介绍过其安装过程，首先打开这个软件；2 应用该软件打开已经准备好的蛋白分子，注意要放在我们指定的文件夹中；3 对该蛋白分子进行加氢反应；4 选择所有的氢原子，点击OK；5 计算蛋白得电荷；6 然后将蛋白保存为PDB格式就好，这个蛋白分子是已经加氢完毕；7 可以直接替

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问microrna载体构建

loveliufudan

miRNA的前体是一段长链RNA，通常会被Drosha核酸酶和Dicer核酸酶剪切成成熟的miRNA分子。在构建miRNA过表达载体时，需要将miRNA的前体序列插入到适当的载体中，以实现高水平的miRNA表达。在设计前体引物时，需要遵循以下原则：引物长度：miRNA的前体长度一般在100到300nt之间，因此前体引物的长度应该在200到500bp之间，以确保充分覆盖前体序列。引物序列：在设计前体

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问什么是析出沉淀制备混悬液？

土井挞克树

就是原本用水溶的更换醇溶，更换溶剂后溶解度会改变

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问cat酶活性计算问题

huarenqiang5

是的，是每个样品的最后一分钟吸光度，建议多次几次然后取平均值这样结果更精准。

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问请问如何对双组分系统中的反应调节蛋白上的Asp进行体外磷酸化？

sswei

根据磷酸氨基酸残基的不同，磷酸化蛋白可分为4类：O-磷酸蛋白、N-磷酸蛋白、酰基磷酸蛋白和S-磷酸蛋白。蛋白质磷酸化的研究方法最广泛使用的技术是Western-blot，质谱和同位素标记结合免疫印迹-化学发光分析，Phos-tagTM SDS-PAGE。

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问为什么毕赤酵母诱导蛋白的酶液有酶活没有蛋白条带？

loveliufudan

毕赤酵母诱导蛋白的酶液有酶活但没有蛋白条带可能有以下几个原因：1.蛋白质表达量很低：在SDS-PAGE分离蛋白质的过程中，如果表达量很低，可能无法检测到蛋白条带。2.蛋白质在毕赤酵母中表达不稳定：毕赤酵母中的表达系统和真核生物不同，蛋白质的表达往往是暂时的、非常短暂的。如果蛋白质表达不稳定，可能在采集样品的过程中已经被降解或丢失。3.蛋白质被部分降解或结构发生改变：蛋白质在毕赤酵母中表达时，可能会

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问细胞程序性死亡与调节性死亡的区别

sswei

细胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）是一种基因指导的细胞自我消亡方式。P程序性细胞死亡的亚型包括细胞凋亡、自噬和坏死性凋亡。调节性细胞死亡涉及效应分子参与的信号级联反应，具有独特的生化特征、形态特征和免疫学后果；其中发生在生理条件下的调节性细胞死亡也被称为程序性细胞死亡(PCD)

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问想请教一下用线虫测过抗氧化相关试剂盒的大佬,你们测定时是怎样取样本进行测定的,是直接将虫子收集超声破碎后取上清进行测定的吗？

晴空a

用组织捣碎机 10000～15000 转/分上下研磨制成 10%组织匀浆。将制备好的 10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机 4000 转/分左右,离心 10～15 分钟，取上清液进行测定。

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问研究对象为某植物，但没有全基因组，该植物目前也没有目标基因的序列，请问该如何设计引物呢？

loveliufudan

如果您想验证研究对象中是否存在某个目标基因，您可以尝试使用PCR或其他分子生物学技术来扩增和检测该基因的存在。以下是可能的步骤：从研究对象中提取DNA。设计引物：您可以使用其他已知植物中的该基因序列来设计引物，以便在研究对象中扩增目标基因。您可以使用多序列比对软件来确定引物的特异性。进行PCR反应：使用所设计的引物进行PCR反应，以扩增目标基因。反应条件可以根据引物长度和序列调整。分析PCR产物：

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问水合半径用什么仪器检测？

土井挞克树

一般来说，水化半径可以通过测量液滴的表面张力来确定。由于液滴的表面张力和它的表面能有关，所以可以通过测量液滴表面能来估算水化半径。另外，还可以通过电镜观察液滴的外观来估算液滴的水化半径。此外，还可以采用像半径测量仪等仪器来直接测量液滴的半径。

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