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蛋白纯化的方法很多，如层析法、电泳法、超离心法、超滤等，其中蛋白质亲和层析法通常只需要一步操作便能将目标蛋白从混合物中分离出来，且纯度很高，因而备受实验者的青睐。在进行蛋白表达时，选择合适的标签有利于蛋白的纯化，促进蛋白的可溶性，因此了解几种常用的蛋白纯化标签很重要。一般来说，常用的蛋白纯化标签主要有 His tag、GST tag、MBP tag、NusA tag、Strep tag 等，那么这些蛋白纯化标签有什么不同之处呢?His tag(组氨酸标签) 融合蛋白是目前最常用的表达方式，其优点是标签小，纯化步骤简便，纯化条件温和，能纯化可溶性/包涵体蛋白，一般不会影响蛋白的功能结构，且可以纯化出大量的目标蛋白，但该标签不适合易氧化蛋白或膜蛋白的纯化。GST tag(谷胱甘肽巯基转移酶) 的洗脱条件温和，有助于保持蛋白功能活性，适合 pull-down 检测，具有很好的线性动态范围。但缺点是分子量较大，可能会影响蛋白质的功能和下游实验。另外，如果蛋白不可溶，很难用变性的方法进行纯化。　MBP tag(麦芽糖结合蛋白标签) 可以减少目标蛋白的降解，增加蛋白的表达量和稳定性，提高表达产物的

在蛋白纯化的过程中，你是否遇到过这样的情形：分泌到真核细胞培养基上清中的标签蛋白，纯化时非常的具有挑战性？ 实验用到的高密度细胞培养基，会将 IMAC 填料上的固定化金属离子剥离，导致在蛋白纯化的过程中，纯化效率较低。除此之外，目的蛋白浓度较低也增加了纯化的复杂程度，较大的上样体积，从而又导致了金属离子的脱落，使得纯化难度增加。那么，上样体积会对纯化效率产生怎样的影响？在之前的蛋白结构解析前沿进展线上沙龙中，IBA Lifesciences 的蛋白质产品与分析总监 Dennis Karthaus, 分享了他们的实验。 一、实验设计选择三种经常用到的表达系统：Expi293TM – protein expression in HEK293 cells ExpiCHOTM - protein expression in CHO cells ExpiSfTM – protein expression in insect cells分别在 293，CHO，和 Sf9 细胞中表达 mCherry-His 和 mCherry-Twin-Strep-tag® 蛋白，使用 Expi Super

在辛辛苦苦进行了表达和纯化目的蛋白后，我们不免会面临另一个问题：如何储存纯化后的蛋白呢？如果不加注意，就会有前功尽弃的可能。首先，储存方法的选择取决于蛋白质的稳定性，以及后续实验使用蛋白质的时间和用途。储存时需要避免接近蛋白质稳定极限的储存条件（例如极端 pH 或者接近蛋白质等电点的 pH）。其次，避免添加会干扰后续实验的成分。 保存方法1. 短期保存（24 小时内）大多数的蛋白质可以保存在 4°C。2. 在 4°C 超过 24 小时 需要考虑对蛋白样品灭菌过滤（使用 0.22 µm 过滤器），或者加入抑菌剂（例如 0.1% 叠氮化钠）以避免细菌生长。值得注意的是，并非所有蛋白质都能在 4°C 长时间保持稳定。3. 长期保存（一周以上）需要将蛋白样品冻存。使用液氮或者干冰/乙醇混合物将其快速冷冻避免蛋白质变性。可以将样品分装至多个管子中，来避免反复冻融可能造成的活性降低或影响结构。可以添加几种稳定剂，如甘油（5 - 50%（w / v）），血清白蛋白（10 mg / ml），还原剂（例如 1 mM DTT）和配体（其性质和浓度取决于靶蛋白的性质和浓度）。4. 保存几个月 可以将其保存在

随机引物适用于长的或具有发卡结构的 RNA。适用于 rRNA、mRNA、tRNA 等所有 RNA 的反转录反应。主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。Oligo dT适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA。（原核生物的 RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具PolyA 尾 巴。）由于 Oligo dT 要结合到 PolyA 尾巴上，所以对 RNA 样品的质量要求较高，即使有少量降解也 会使全长 cDNA 合成量大大减少。 基因特异性引物与模板序列互补的引物，适用于目的序列已知的情况。天为时性引物代公司的 SuperScript One-Step System 特别适合于与基因特异性 引物连用。 PCR 扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。 原因建议引物引物特异性差重新设计引物，改变引物的位置和长度，增强其特异性或使用巢式 PCR引物浓度过高适当减少引物浓度Mg2+ 浓度Mg2+ 浓度过高适当降低 Mg2+ 浓度，从1mM 到 3mM，间隔 0.5mM 进行一系列反应，确定对于每个模板和引物对的最佳镁离子

基因表达的检测有几种方法。经典的方法（仍然重要）是根据在细胞或生物体中所观察到的生物化学或表型的变化来决定某一特定基因是否表达。随着大分子分离技 术的进步使得特异的基因产物或蛋白分子的识别和分离成为可能。 随着重组 DNA 技术的运用，现在有可能检测。分析任何基因的转录产物。目前有好几种方法广泛应用于 于研究特定RNA分子。这些方法包括原位杂交、NORTHERN凝胶分析、打点或印迹打点、S－1 核酸酶分析和RNA酶保护研究。这里描述 RT-PCR 从 RNA 水平上检查基因表达的应用。RT-PCR检测基因表达的问题讨论关于 RT-PCR 技术方法的描述参见 PCR 技术应用进展， 在此主要讨论它在应用中的问题。理论上 1μL 细胞质总 RNA 对稀有 mRNA 扩增是足够了（每个细胞有1 个或几个拷贝）。 1μL 差不多相当于 50－100，000个典型哺乳动物细胞的细胞质中所含RNA的数 量，靶分子的数量通常大于50，000，因此扩增是很容易的。该方法所能检测的最低 靶分子的数量可能与通常的 DNA PCR 相同；例如它能检测出单个 RNA 分子。 当已知量的转录 RNA（用 T7R

一、知识背景1. 基因表达：DNA——RNA——Protein单拷贝基因表达存在逐步放大机制，如一个蚕丝心蛋白基因——104 个丝心蛋白 mRNA（每个 mRNA 存活 4 d，可以合成 105 个丝心蛋白）——共合成 109 个丝心蛋白 。因此单拷贝基因的 mRNA 表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。 2. PCR 技术（Polymerase chain reaction）：即聚合酶链式反应。在模板、引物和四种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于 DNA 聚合酶的酶促反应，其特异性由两个人工合成的引物序列决定。反应分三步：A.变性：通过加热使 DNA 双螺旋的氢键断裂，形成单链 DNA；B.退火：将反应混合液冷却至某一温度，使引物与模板结合。C.延伸：在 DNA 聚合酶和 dNTPs 及 Mg2＋存在下，退火引物沿 5‘ —— 3’ 方向延伸。以上三步为一个循环，如此反复。 3. 逆转录酶和 RT-PCR逆转录酶（reverse transcriptase）是存在于 RNA 病毒体内的依赖 RNA 的 DNA 聚合酶，至少具有以下三种活性：(1)依赖 RNA 的 DNA 聚合酶活性

许多试剂检测都涉及到标准曲线的问题，标准曲线做的好与坏会直接影响到实验的结果，甚至是关系到实验的成败，那么究竟如何绘制或制作标准曲线呢？一、做标准曲线样品检测时有几个问题需要注意1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段，即曲线几乎成直线的范围内。3、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。4、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。5、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999.二、选择什么方程去拟合用于免疫检测的所谓“标准曲线”其实称为拟合曲线比较合

一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化，不同点如下：1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其相同。2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。4、免疫荧光在封片时常使用专用封片剂或甘油：0.01M PBS （1：1）。条件许可，建议购买抗淬灭的封片液，使标本可以保存更久。5、荧光抗体的孵育以及后续处理需要避光。6、荧光抗体染色假阳性可能会多，需要分别设定阳性和阴性对照。 二、注意事项1、荧光染色后一般在 1h 内完成观察，或于 4℃ 保存 4h ，时间过长，可能会使荧光提前衰退。2、每次试验均需设置以下三种对照：（1） 阳性对照：阳性血清+荧光标记物；（2）阴性对照：阴性血清+荧光标记物；（3）荧光标记物对照：PBS +荧光标记物。 三、免疫荧光双标的经验之谈1、选取一抗时，要求来源于两种不同的动物，我用的是来源于家兔和大鼠的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是 donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti-rat-Tex-Red（红）。2、

简介免疫细胞是一组不均一的细胞群体。各种特定的细胞群其细胞表面表达有各自特异的表面标志分子，利用这些特异的表面标志，可以鉴定、分离和纯化相应的细胞群。随着单克隆抗体技术的诞生和免疫标记技术（特别是荧光标记技术）的发展，以及计算机科学的应用，使利用仪器的方法检测特异的细胞膜表面分子成为可能。本章介绍的荧光激活细胞分类技术就是采用单克隆抗体技术和免疫荧光标记技术，并结合光学检测和计算机分析技术而产生的鉴定和分离特定细胞亚群的技术。原理流式细胞仪（flowcytometer）是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置，由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物，因此，用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪（fluorescenceactivatedcellsorter，FACS），是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。其原理是在一组混合的细胞群中，加入特异的针对特定靶细胞表面分子的荧光标记单克隆抗体，这种特异单克隆抗体与其对应的抗原靶分子结合，结合后的荧光标记抗体停留在特定细胞的表面，称为荧光抗体标记的靶细胞；将含有被标记细胞的混合细胞群

对于养细胞的人来说，“黑胶虫”、小黑点经常出现在我们的耳边或细胞中，每个人对于黑胶虫的认识都观点不一，现在仍存在许多争议。如今见于各大论坛的帖子也久未更新，我就自己养细胞过程中对“黑胶虫”的认识做一个总结，不足之处欢迎拍砖！ 刚开始养细胞的时候，经常碰到有一些小黑点，有人认为是细胞死亡后裂解的碎片，有人认为是支原体污染，有人认为是黑胶虫。首先有没有黑胶虫呢？附件中有黑胶虫视频，大家可以看一下，养的很好！据我观察，的确黑胶虫刚开始会使细胞形成许多空泡和碎片，并形成许多小黑点，主要呈布朗运动，这个时候比较难鉴定，但是如果在高倍镜下观察到呈视频中直线运动的虫子，那必定是黑胶虫无疑！ 如果你的细胞有保种过，建议重新复苏，放弃治疗！如果是原代培养的细胞或比较珍贵的情况下，需要抢救怎么办？双抗是没有用的，本人尝试过“环丙沙星+哌拉西林”，亲测可用！另外一位战友也有提到，一并贴在这里http://www.dxy.cn/bbs/topic/25761395?keywords=%E9%BB%91%E8%83%B6%E8%99%AB 以上药物主要参考以下文献 Gray,

通过在论坛中和站友们的交流，我发现很多求助细胞的站友培养细胞时间并不长，部分站友甚至没有经过系统的培训，仅靠课本知识和少量指导就开始尝试培养细胞，在培养过程中难免遇到不少问题，最常见的便是细胞污染。本人从读研开始接触细胞培养到现在近十年，从最开始的向实验室师兄师姐学习，到后来工作后和其他同事之间相互交流，在细胞培养这块还略有心得，所以我就个人的经验谈下我是如何防治细胞污染的，希望能帮到大家。 无论新人还是老手，在细胞培养过程中都可能遇到细胞污染的情况。那对于细胞污染，个人觉得最重要的是预防，因为细胞一旦污染，想救是非常困难的，即便救活，细胞状态也会变差，进而影响实验结果，所以我这边先来讲讲如何预防。生物安全柜是细胞处理的主要场所，而培养箱是细胞生长的主要场所，所以细胞污染通常就发生在这两个地方。那么在使用生物安全柜和培养箱时如何做好预防措施呢？ 首先，所有进入安全柜的东西都要尽可能保证无菌。如果实验室条件允许，那直接购买商品化的试剂和耗材是最稳妥的，例如Gibco、Hyclone的试剂，Eppendorf、Corning的耗材，这些大品牌的试剂和耗材一般只要是

关于如何鉴定收到的新细胞是否有污染，很多站友，特别是新接触细胞培养的站友通常没有太多经验，在此我分享下我这边接收到新细胞后是如何判断是否有污染的。一、肉眼观察以下几项：1. 细胞瓶身：如果瓶身上没有裂缝，正常；如果瓶身上有裂缝，则污染几率非常大。2. 培养基颜色：如果培养基颜色是红色或者粉色，正常；如果是橙色，则可能是污染或者细胞过密；如果是黄色，则污染几率非常大。3. 培养基澄清度：如果培养基澄清，正常；如果有少许漂浮物，则可能是污染或者有细胞凋亡；如果培养基很浑浊，甚至出现絮状物，则污染几率非常大。二、进行显微镜下观察（通常观察前需先静置细胞1-2h）显微镜下可以清晰观察到细胞是否有菌类污染，菌类污染通常分为杆菌、球菌和霉菌，为了方便大家分辨，我特地找了之前收到有典型污染的细胞照片，希望能帮助大家判断。1. 杆菌常见的有大肠杆菌，长度通常在2-5um左右。2. 球菌常见的有葡萄球菌，直径通常在1-2um左右。3. 霉菌常见的有毛霉，菌丝宽2-10um左右，长度短则几十um，长则可达几mm。 需要提醒的是，因为运输过程中细胞离开了其正常生长所需要的环境，部分细胞会出现凋

污染的类型 细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。 一、细菌污染 细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。 培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。 二、真菌污染 真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在霉雨季节进行细胞培养更易污染。最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。 培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状

细胞培养中的污染化学污染化学污染是一些对细胞有毒性的或对细胞产生刺激的化学物质。这些污染一般来自于没有洗净的器皿、不纯的化学试剂和质量较差的蒸馏水等。化学污染中比较引人注意的是细菌内毒素。它是革兰氏阴性细菌细胞死亡后解体释放出的疏水性的细胞壁组成物质，对塑料等疏水性强的物质有很强的吸附能力。细菌内毒素可刺激部分细胞产生一些激素或细胞因子，对细胞生长和实验结果产生影响。细菌内毒素是临床上的最主要的热原（即注射到动物体内会导致动物发热），所以通过细胞培养生产的疫苗、细胞因子等用在临床上的药品的生产过程中更是要避免细菌内毒素的污染。生物污染生物污染包括比较容易发现的细菌、霉菌和酵母的污染，和较难发现的病毒、支原体和其他细胞的污染。细菌、霉菌和酵母到处存在，它们能在合适的环境中非常快速的生长。这些污染比较容易观察到，它们往往会使其污染的培养液产生可见的变化，或者通过显微镜观察就可以看见。由于病毒有种属特异性，所以病毒污染的概率比较小。但是病毒污染难于发现，因为病毒颗粒特别微小，一般的实验室都没能力检查细胞培养中污染的病毒。由于病毒一般潜伏在细胞内，对整个细胞培养不是致死的，所以它可能会使研究人

丁香园网友simon的观点：支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0．2um)并独立生活的微生物．约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性．可为圆形、丝状或梨形。支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构．其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似，但微绒毛电子密度比支原体小，且中央无颗粒群或中央束。支原体代谢需固醇类物质、部分种类需要精氨酸、O 2或葡萄糖，每一种支原体都有自身持点。多数支原体适合于偏碱条件下生存(PH7．6—8．0)，对酸耐受性差。对热比较敏感，对一般抗生素不敏感。支原体污染细胞后．培养液可不发生混浊．多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解．因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢．甚至从培养器皿脱落。为确定有无支原体污染可做如下检酗：①相差显微境检测：将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上，24h后取出，用相差油镜观察．支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。②荧光染色法：荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料H

细胞培养中的无菌技术：1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株的操作。2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面的中央无菌区域，勿在边缘的非无菌区域操作。3. 小心取用无菌的实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或容器瓶口，亦不要在打开的容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。4. 工作人员应注意自身的安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染

细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦

这段做MTT走了不少弯路，后来看了园子里有许许多多的建议和指导，再做时结果好了很多，心里很是感激，于是把众多的帖子进行了总结，希望对后来者有所帮助！同时感谢各位前辈的良帖！！MTT大汇总实验前应明确的问题1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。2.药物浓度的设定。一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。3. 时间点的设定。在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。4.培

一、GUS报告基因的定性检测GUS能与显色底物X-gluc 反应，显现蓝色，因而可以通过组织化学染色定性研究GUS的表达水平和表达模式。GUS 染色的稳定性好，组织定位精确，成为在植物中运用很广的报道基因。1. GUS染色底物的配制试剂名称母液浓度母液配制方法工作液浓度工作液配制方法磷酸缓冲液（pH7.2）0.5 M将0.5 M Na2HPO4 和0.5 M NaH2PO4 混合50 mM1 mlTriton X-10010%取10 ml Triton X-100溶于水，定容至100 ml0.1%0.1 ml铁氰化钾K3Fe(CN)6100 mM将3.2924 g 铁氰化钾溶于水，定容至100 ml2 mM0.2 ml亚铁氰化钾K4[Fe(CN)6] •3 H2O100 mM将4.2239 g 亚铁氰化钾溶于水，定容至100 ml2 mM0.2 mlEDTA0.5 M将18.61 g Na2EDTA•2H20溶于水，调pH为8.0，定容至100 ml水10 mM0.2 mlX-Gluc//2 mM10.4 mgddH2O///定容至10 ml表1. GUS染色底物的配制_0.5_M_

大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。（一）水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，提取时需要均匀的搅拌，以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此，温度高利于溶解，缩短提取时间。但另一方面，温度升高会使蛋白质变性失活，因此，基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温（5度以下）操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制剂（如二异丙基氟磷酸，碘乙酸等）。下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。1、pH值蛋白质，酶是具有等电点的两性电解质，提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH 范围内。用稀酸或稀碱提取时，应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生变化，从而导致蛋白质构象的不可逆变化，一般来说，碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。2、盐浓度稀浓度可促进蛋白质的溶，称为盐溶作用。同时稀盐溶液因