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癌细胞有一系列不同于正常细胞的特性，如分化程度减弱，细胞形态和功能异常，自主性生长，浸润转移性和免疫性异常，体外培养无接触抑制和在软琼脂中形成集落的特性，癌细胞体外培养是研究癌变机理和癌细胞行为的极好方法，能为肿瘤病因学、遗传学和药理学等提供便利的条件。同时也是研究癌细胞的药物敏感性和诱导分化发生恶性逆转的最理想的对象。 一、肿瘤病因和发病机制的研究 癌细胞在体内恶性变时，易于形成肿瘤，但到体外培 ...

1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟 ...

染色技术是分类白细胞的经典依据，但瑞氏染色这类形态学复合染色不能被自动分析所模拟。一般光学技术只能测到光强等量的参数，而不能测得波长等属性的参数。因此，自动分类就要求用单染来甄别。 过氧化氢是生物氧化还原反应的最重要氧化剂，在吞噬过程中广泛应用。因此，可以根据细胞过氧化氢酶染色来推断白细胞的吞噬功能强弱，并结合细胞的大小，从而将白细胞分为：高过氧化氢酶的嗜酸性粒细胞、次之的中性粒细胞、较弱单核细胞 ...

前言 血小板活化试验，对于血小板功能、心血管疾病的研究，有重要意义。使用流式细胞仪进行多参数分析，可以特异、灵敏地检测血小板表面标记，了解血小板的活化状态和反应性，并同时获得更多关于血小板的信息。在疾病监测、血小板疾病患者的筛选、预测并发症等方面有良好的应用前景。 使用推荐的三色流式分析方法检测血小板活化的优点是： 检测血小板的反应性；了解血小板活化进程；血小板先发生膜糖蛋白变化， ...

一、开机程序 1．检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。 2．打开储液箱，倒掉废液 并在废液桶中加入 400ml 漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用三蒸水，做分选必须用 PBS 或 FACSFlow ），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。 3．将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY ，预热 ...

流式细胞术（FCM）简述 流式细胞术 (Flow Cytometry)是70年代发展起来的一种利用流式细胞仪对细胞等生物粒子的理化及生物学特性（细胞大小、DNA/RNA含量、细胞表面抗原表达等）进行定量、快速、客观多参数相关检测分析的新技术。它借鉴了荧光显微镜技术与血球计数原理同时利用荧光染料激光技术单抗技术以及计算机技术的发展大大提高了检测速度与统计精确性而且从同一个 ...

扫描电子显微镜扫描电子显微镜（scanning electron microscope，SEM）于20世纪60年代问世，用来观察标本的表面结构。其工作原理是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与电子束入射角有关，也就是说与样品的表面结构有关，次级电子由探测体收集，并在那里被闪烁器转变为光信号，再经光电倍增管和放大器转变为电信号来控制荧光屏 ...

自Nakane(1966)建立了免疫酶标记技术以来，这门技术得到了迅速的发展。DAKOEPOS先进的多聚螯合物免疫组化一步染色法，是一种即用型快速而有效的方法，具有更为简便、更为敏感和高特异性的特点。 1.材料和方法 1.1 材料 均为本院日常活检组织共32例，其中肉瘤5例，淋巴瘤7例，上皮癌12例，胶质瘤8例。用10％甲醛固定，常规脱水、包埋、切片。 1.2 试剂 EPOS- ...

细胞培养品 名:细胞培养 拼音:xibaopeiyang 英文名称：culture of cells 说明:包括微生物细胞、植物细胞和动物细胞培养。将动植物组织或细胞从机体取出，分散成单个细胞或直接以单细胞生物，使其在含有必要生长条件的培养基或培养瓶中继续生长与增殖。细胞培养是细胞生物学研究方面十分重要的技术。细胞周期及其调控、癌变机理、衰老、基因表达与调控等重要进展都离 ...

1. 如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM 中培养的细胞，很可能在 DMEM 或 M199 中同样很容易生长。总之，首选 MEM 做粘附细胞培养、 RPMI- 1640 做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是 AIM V 培养基（ SFM ） 2. 为什么要热灭活血清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋 ...

流式细胞仪介绍 流式细胞仪就是进行流式细胞分析的仪器，它集电子技术、计算机技术、激光技术、流体理论于一体，是一种非常先进的检测仪器，被誉为试验室的“CT”。 流式细胞术（Flow CytoMeter FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精 ...

1．机械刮除法： 是用不锈钢丝末端插有橡胶刮头（用胶塞剪成三角形插以不锈钢丝）、或裹少许脱脂棉制成，装入试管中高压灭菌后备用（也可用特制电热烧灼器刮除）。刮除程序为： （1）标记：镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位； （2）刮除：弃掉培养液，把无菌胶刮伸入瓶皿中，肉眼或显微镜窥视下，刮除无标记空间； （3）用Hanks液冲洗一两次，洗除被刮掉的细胞； （4）注入培养液 ...

一、MTT比色法检测细胞活性 （一）原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。 （二）试剂准备 1、 青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中 抽滤除菌。 2、 L15基础培养基：1000mlL15培养基，加2g ...

巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活 2 － 3 周，多用做原代培养，难以长期生存。 巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如 P338D1 、 S774A.1 、 RAW309Cr.l 等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离， ...

用DAPI进行细胞染色 DAPI的配置 Stock solution of 1mg/ml in ddH2O; working solution of 0.25mg/ml to 50mg/ml in ddH2O or PGM. 1.Place sample on slide. 2.Add a few drops working solution. 3.Squash and vie ...

一． 设备： 无菌操作设备。 二． 大型设备CO2培养箱：恒温5%、10%CO2维持培养液中pH值。 倒置显微镜：用于每天观察贴壁细胞生长情况。 解剖显微镜，用于准确地取材。 常温冰箱：-4℃，用于保存各种培养液，解剖液和鼠尾胶。 低温冰箱：-20℃--80℃，用于储存血清酶，贵重物品和试剂。 电热干烤箱：用于消毒玻璃器皿。 高压消毒锅：用于消毒培养皿，手术器械。 过滤器：配制解剖 ...

1.如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件： 细胞系 细胞类型 种 组织 推荐使用的培养基 293 成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM 1 ...

细胞诊断要诀 镜下观察要周到，每个视野不漏掉； 看完背景看细胞，低倍高倍仔细瞧； 先看形态和大小，核浆比例有多少； 核的结构最重要，核质又多又粗糙； 核膜核仁均异常，病理分裂偶见到； 单个细胞不能断，足量细胞方有效； 只有成堆无分散，重复检查再报告。 肿瘤细胞分类要诀 肿瘤细胞四类型，抓住特点能分清； 鳞癌细胞多形性，核如墨染胞浆红；（角化型） 腺癌细胞类圆形，胞浆空泡是特征； 核膜增厚核仁大，核 ...

组织培养（tissue culture)又称体外实验（in vitro)。 无菌条件下，将从机体取得的组织块或细胞置于体外的模拟体内各种条件下进行培养，培养条件包括适宜的营养液、O2、CO2、PH值、渗透压与温度等，还要防止微生物污染。可在倒置相差显微镜下直接观察生活级胞的运动、增殖、分化、吞噬等动态变化，并可用显微摄相、显微摄电影或显微录像等真实记录下生活细胞连续变化的过程强。 ...

从单个核细胞中分离T细胞 1）用玫瑰花结形成试验分离E＋细胞 1．制备AET-绵羊红细胞 1）在刻度离心管中，用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次，每次离心500×g 10分钟。 2）吸净上清液，测量红细胞比容。轻击试管分散红细胞，加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液，混匀。室温中反应30分钟。 3）用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤AET-绵羊红细胞5次 ...