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        绒毛染色体制备

        互联网

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        绒毛来源于胚胎的中胚层,最早的初级干绒毛出现于孕三周初,孕8周左右是绒毛发育最旺盛时期。目前国内外绒毛取材多选于8-9周。研究资料表明,绒毛取样不影响胚胎的发育及胎盘的功能。但取样的失败可导致胚胎丢失而终止妊娠。

        绒毛取样前者首先要检查阴道分泌物以判别阴道的洁净度,防止取样导致宫内感染。其次需做B超检查,一是确定胚胎大小,二是确定胚芽有无心血管搏动,三是确定胚芽在子宫内的位置,用以判别取材时间,是否取材及取样器进宫的角度及深度。

        1、 实验材料

          妇科阴道冲洗物品、绒毛取样器、5ml注射器、培养皿、小镊子、5ml离心管、甲酸、柠檬酸钠、冰乙酸、PMRI 1640、秋水仙素、载玻片等。

        2、 培养液配制

          PRMI 1640 10-15ml
          秋水仙素10ug/ml 1ml

        3、 操作过程

        (1)1‰新洁而灭冲洗阴道,用卵圆钳固定子宫颈,根据妇查及B超提示选择角度及浓度探性插入绒毛取样器,当有弹性阻挡感且深度符合B超所示时,抽出取样器内芯,接上5ml注射器,抽出4-5ml,此时,注射器内可见有血性液体流进;

        (2)取一干净培养皿,内加PRNI 1640 5ml,内含秋水仙素0.06ug/ml。慢慢抽出取样器,将所吸出物注入培养皿内,并用1640冲洗注射器及取样器,混匀。置培养箱30-40分钟;

        (3)挑选发育良好的绒毛放入另一小培养皿中,用预温37℃的0.075M。KCL与10%柠檬酸钠1∶1混合液漂洗两次;

        (4)用眼科小剪剪碎绒毛,再将2滴秋碱加入上途漂洗低渗液低渗30分钟;

        (5)加3∶2的甲醇冰乙酸固定液0.2ml,预固定,1000rpm8分钟,弃上清液;

        (6)加新鲜配制的3∶2固定液3ml;固定30分钟,2000rpm8分钟,弃上清液;

        (7)第二次固定可加3∶1甲醇冰乙酸固定液3ml固定30分钟,2000rpm8分钟,弃上清液;

        (8)离心后,加所余体积的60%冰乙酸,打匀,2分钟后加等量甲醇,打匀,2000rpm8分钟,弃上清液;

        (9)3m1 3∶1甲冰固定液过夜,冰水制片;

        (10)80℃考片2小时,自然冷却;

        (11)G分带处理,观片。

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