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This method is derived from a procedure developed by Toby Bradshaw and the Poplar Molecular Genetics Cooperative. We have tested the procedure with a variety of Populus species, as well as tobacco and Arabidopsis . The resulting DNA is of sufficiently high quality for PCR (including RAPD), restriction digests, and ligation reactions. However, it is extemely important to use the youngest leaves available for Populus , as DNA from older leaves is often contaminated with compounds that can interfer

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The following protocol is based on our modifications of R. Kraft, J. Tardiff, K. S. Krauter, and L. A. Leinwand. Biotechn . 6(6):544-545, 1988. Inoculate 2-5 ml of L broth containing the appropriate antibiotic from a single bacterial colony. Incubate at 37℃ overnight with vigorous shaking. Follow the Plasmid Quick Prep protocol through the potassium acetate step to isolate plasmid DNA. Add DNAse-free RNAse to 50µg/ml, incubate, 37℃ from 10-30 minutes. Phenol extract the solution, saving the uppe

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1. Remove gel slice contain DNA fragment and place in 10 volumes of: 300 mM NaOAc, pH 7.0 300 ml 1 M NaOAC, pH 7.0 1 mM EDTA 2 ml 500 mM EDTA, pH 8.0 698 ml ddH2O 2. Incubate at 22℃ for 30 min. Transfer gel slice to a fresh tube. 3. Place tube in a Dry Ice/Ethanol bath for 5 min. 4. Puncture the bottom of a 0.5 mL microcentrifuge tube with a needle. Place the gel slice into this tube. Place this tube inside a 1.5 mL microcentrifuge tube. 5. Centrifuge for 15 min. 6. Collect the Eluent from the 1

CTAB TECHNIQUE / Method / Schedule / Protocol (JPB) FOR DNA ISOLATION / DNA EXTRACTION FROM PLANT LEAF / LEAVES SAMPLES (see also DNA RNA double isolation procedure if both DNA and RNA are needed) Rea ...

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“多莉”的诞生，意味着人类可以利用动物的一个组织细胞 ，像翻录磁带或复印文件一样，大量生产出相同的生命体，这无疑是基因工程研究领域的一大突破。 人们剪下植物枝条，扦插到土里，不久就会发芽，长出新的植株，这些植株是遗传物质组成完全相同的植株，这就是“克隆 ”。还有将马铃薯等植物的块茎切成许多小块进行繁殖，由此而长出的后代也是“克隆 &rd ...

一、DNA 提取　 SDS 高盐法(方案1) 具体步骤: 称取1 g 土壤，放入研钵中，倒入适量的液氮，立即研磨；再倒入适量的液氮，研磨，重复3 次，使土壤颗粒研成粉末； 将13.5 ml 提取缓冲液(0.1 mol/L磷酸盐 ，0.1 mol/L EDTA ，0.1 mol/L Tris-HCl ，1.5 mol/L NaCl ，1.0 % CTAB) 和50&mu ...

序列测定的技术和策略 Sanger双脱氧链终止法 Maxam－Gilbert DNA 化学降解法 测序策略 目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA 上 ...

转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中，核酸包括DNA （质粒和线性双链DNA ），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。早期的磷酸钙转染法转染效率很低，且对很多细胞株无效，因此不能满足很多科 ...

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PCR克隆主要有TA克隆法 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。 但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的专利权。 TA克隆方法（Original TA Cloning Kit） 利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR扩增产物的3`端自动 ...

第一节 概 述 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆 较小的DNA 片段(＜10kb)且结构简单质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆 从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段 然后体外使两者相连接 再用所得到重组质粒转化细菌即可完成。但在实际工作中 如何区分插入有外源DNA 的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中 ...

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体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组 研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于我们了解蛋白质结构和功能的关系，探讨蛋白质的结构/结构域。而利用定点突变技术改造基因，相信大家也非常熟 ...

在分子生物学研究中，DNA 的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和 Gilbert（1977）发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，产生A，T，C，G四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而获得DN ...