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1 前言 RNA 是生物体内最重要的物质基础之一，它与 DNA 和蛋白质一起构成生命的框架。但长久以来， RNA 分子一直被认为是小角色。它从 DNA 那儿获得自己的顺序，然后将遗传信息转化成蛋白质。然而，一系列发现表明――这些小分子 RNA 事实上操纵着许多细胞功能。它可通过互补序列的结合反作用于 DNA ，从而关闭或调节基因的表达。甚至某些小分子 RNA 可以通过指导基因的开关来调 ...

1． 希望软件可以在 web 上使用。 即用户可以访问我们的网站， 输入基因代码， 即可自行在网上设计 siRNA Oligo 。 2． 可参照的软件形式： 见如下网站： www.dharmacon.com www.ambion.com www.qiagen.com 3． 希望能就每一个所指定的基因找到至少四对以上可合成的双 ...

为了获得全长的cDNA 5’及3’末端序列，许多研究人员使用了称之为cDNA末端快速扩增，或RACE的方法。传统的RACE方法得到的PCR产物含有全长及断裂的cDNA产物。GeneRacer™试剂盒确保您只得到含有全长cDNA末端的完整序列，是您得到更高效的结果并节省您的时间 GeneRacer™的优点 确定一个基因的全长序列对于研究异源转录起 ...

近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。 一、RNAi的分子机制 通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation a ...

体外制备 1.化学合成 许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3―4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。 最适用于：已经找到最有效的siRNA的情况下，需要大量siRNA进行研究 不适用于：筛选siRNA等长时间的研究，主要原因 ...

1.相似性序列发生Cross－react引起脱靶效应。 2.监测手段：对脱靶效应的监测一般通过基因芯片来监测。Gene expression profiling对脱靶效应。 3.脱靶效应的特性： 转录物表达模式有序列特异性和靶特异性两种。 4.大部分脱靶效应具有siRNA序列特异性。 低浓度也可能产生脱靶效应，不仅仅是高浓度能产生脱靶效应的假象。 脱靶效应在蛋白和mRNA水平同时考虑进行分析，要缜 ...

越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA（small interfering RNAs，siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短片断双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA，这个过程就是RNA干扰途径（RNA interference pathway）。RNAi的应用包括功能基因组学，药物靶筛选，细胞信号传导通路分析等等。 目前为止较为常用的5 ...

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(doublestrandsRNA，dsRNA)引起的，广泛存在于动物植物中的序列特异性转录后基因沉默过程，是生物体在进化过程中，抵御病毒感染及由于重复序列和突变引起基因组不稳定性的保护机制。Elbashir等发现，一种称为短干扰或小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)的RNA干扰中间体，能在果蝇中导致mRNA的降解。这种iRNA为2 ...

A．普通阴性对照 1.siRNA实验应该有阴性对照； 2.通用阴性对照为与目的基因的序列无同源性的普通阴性对照； 3．Scrambled阴性对照和选中的siRNA序列有相同的组成，但是和mRNA没有明显的同源性； 4．阴性对照需要确定和目的靶细胞中其它基因同源性很低。 B．荧光标记阴性对照 1. RNAi negative control与哺乳动物基因无同源 ...

目前RNAi技术已经进入了生物科学研究的许多领域，成为了一种主要的生物学研究工具，发展得相当迅速，并受到了此次诺贝尔奖评审委员会的青睐，获得2006年诺贝尔奖医学/生理奖。然而这一才历经十个年头的技术依然对于许多研究人员来说还是很陌生的，以下是有关 i技术在哺乳动物细胞中应用的具体设计策略，主要来自于《遗传》杂志2005年“ 干涉（i）技术应用于哺乳动物细胞的研究策略”，希 ...

来自上海某研究所的某博士的研究课题是寻找导致某种疾病的相关基因，最近他获得了这一疾病的微卫星家族标记图谱，但是这种串联重复的微卫星位点并不能完全满足他的分析要求，因此他决定转向作单核苷酸多态性SNPs（single nucleotide polymorphism，发音为“snips”）基因分型。 确实，如果你的研究课题也是寻找易感基因，那么SNPs是一种比较而言可行而且高效 ...

Selection of siRNA duplexes from the target mRNA sequence Using Drosophila melanogaster lysates (Tuschl et al. 1999) we have systematically analyzed the silencing efficiency of siRNA duplexes as a fun ...

Protocol for Isolation of Genomic DNA from Mammalian Cells 1.Trypsinize harvest and resuspend cells at 107 / ml in 10 mM Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM EDTA. 2.Add SDS and Proteinase K to a final concentrat ...

Gene (Ref) Accession # Position from ATG ...

Ribonuclease Protection Assay contributed by James McCaughern-Carucci Yale University Most RNase Protection protocols require an overnight hyb with numerous subsequent clean-up steps. This method requ ...

1. Add appropriate volumes of RNA (<12 ul) plus probe (< 3 ul). Try 5 and 10 ug RNA plus 600 or 800 pg dig labelled probe. 2. Include 2-3 yeast RNA samples/probe used. 2ul of 5mg/ml stock. 3. A ...

Hot phenol may also be used to remove DNA. 1. Add equal volume of TE-saturated phenol to RNA solution. Mix. 2. Heat to 70 ℃ for 5 minutes. 3. Centrifuge at top speed for 10 minutes at room temperature ...

The Queensland Institute for Medical Research (QIMR) lab's method for automated sequencing for expressed sequence tags from Schistosoma japonicum and/or S. mansoni cDNA libraries constructed in the di ...

来自一家名为“ＡＬＮＹＬＡＭ”的生物技术公司的研究人员在11日出版的《自然》杂志上报告说，他们通过转基因技术 在ＲＮＡ（核糖核酸）干扰技术的研究上取得了突破，为治疗糖尿病 、癌症等疾病带来了希望。 ＲＮＡ干扰是一种由双链ＲＮＡ诱发的“基因沉默”。在此过程中，致病细胞中与双链ＲＮＡ有同源序列的信使ＲＮＡ被降解，从而抑制了致病基因的表达。ＲＮＡ干扰技术在 ...

本制品是一种快速方便的总RNA提取试剂，可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取总RNA。样品在RNAiso Reagent中能够充分被裂解，在加入氯仿离心后，溶液会形成上清层、中间层和有机层（下层)，RNA分布在上清层中，收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。 RNAiso Reagent具有很强的广谱性，可以适用于各种样品的总RNA提取，提取过程方便快速，整个操作在一 ...