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Based on: Wan C.-Y. and Wilkins T.A. 1994. Anal. Bioch. 223:7-12. 1.Collect young expanding leaves (or other tissue) and freeze in liquid N2 and store at -80℃. 2.Pulverize tissue to a fine pow ...

1) Place gene of interest between T7 promoters in Òdouble T7Ó plamsid. (slightly more difficμlt alternative: Place gene of interest in hairpin/inverted repeat config ...

Protocol for the cloning of pSHAG-MAGIC2 shRNAs Gregory HannonCold spring harbor lab pSHAG-MAGIC2.doc ...

Chemicals needed: Glucose L-(+)-Arabinose Sigma Cat # A3256 L-Rhamnose Sigma cat # R3875 Cb (carbenicillin) Sigma cat # 1389 DL-p-Chlorophenylalanine Sigma ...

RNA Isolation - Volumes and weights are for 10 ml cultures (1-2 x 107 cells/ml). 1.Spin down cells decant and resuspend in 0.2 ml extraction buffer with SDS and transfer to a 1.5 ml eppendorf tu ...

RNA干扰（RNA interference RNAi）正在迅速成为最受欢迎的阻断特异基因表达的技术。RNAi技术允许科学家关闭他们想要研究的基因，这是一种全新的令人激动的研究方法，通过研究基因表达缺失时细胞的表型，以确定基因的功能。最初，通过在无脊椎动物如：果蝇（Drosophila）和线虫（C. elegans）导入长的双链RNA，揭示了RNAi是一种降低特异基因表达的强有 ...

This is the preferred method for yeast RNA preparation use Gloves and RNAse free solutions throughout. 1. Use a YPD overnight culture to innoculate fresh YPD media and grow cells at 30 degrees overni ...

RNAi 实验中双链短RNA（dsRNA）制备过程，本实验方法来自于加州大学Jim教授实验，很权威！ Procedure for the Generation of dsRNA for use in RNAi 1.Design polymerase chain reaction (PCR ) primers that will amplify 600-800 bp of sequenc ...

alimama_pid="mm_10043573_137377_1822161"; alimama_titlecolor="FF9900"; alimama_descolor ="552c55"; alimama_bgcolor="f7f7f7"; alimama_bordercolor="f7f ...

最糟糕的心态-实验失败了，抱怨试剂不好。实验人员本来是应该拥有修正主义、机会主义、怀疑论等诸多“不完美的”意识，所以一定要用“完美的”自我批评意识来平衡。我为什么没有一双慧眼选择可靠的供应商？我为什么不做预实验检测所购试剂？ 最糟糕的知识-RNaseA的作用。RNaseA是内切酶，内切酶的作用结果是产生片段，而不是单个核苷酸，所以，RNaseA作用于 ...

RNA酶保护试验(RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点： 1． 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损失，使灵敏度下降，而RPA将所有杂交体系进行电泳，故损失小，提高了灵敏度。 ...

Promega公司的RibocloneR M-MLV(H- ) cDNA合成系统采用M-MLV反转录酶的RNase H缺失突变株取代AMV反转录酶，使合成的cDNA更长。该系统的第一链合成使用M-MLV反转录酶，cDNA第二链合成采用置换合成法，采用RNaseH和DNA聚合酶Ⅰ进行置换合成，最后用T4 DNA聚合酶切去单链末端，方法简便易行。该系统试剂包括： 20μg 特异性引物 200& ...

1）检测RNA 溶液的吸光度 280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0时，我们认为RNA 中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是<2.2的）。当R<1.8时，溶液中蛋白或 ...

一．原理 RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分，也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制，已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究，首先要获得该性状基因，从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是至关重要的，如Northern印迹及杂交分析、cDNA合成等实验的成效在很大程度上取决于RNA的质量。利用提取 ...

利用RACE ，可以很简单地得到mRNA的5＇末端序列，然而5＇RACE是一个很复杂的技术，它的成功依赖每一步反应的有效完成（图1）。cDNA第一链的合成是由一个反义的基因特异性引物（Gene－specific primer，GSP）来起始的，cDNA第一链纯化后，利用末端脱氧核苷酸转移酶（Terminal deoxynucleotidyl transferase，TdT）在cDNA的 ...

第一节 概 述 从真核生物的组织或细胞中提取mRNA，通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链，将双链cDNA和载体连接，然后转化扩增， 即可获得cDNA文库，构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。总之cDNA的合成和克隆已成为当今真核分子生物学的基本手段。自70年代中叶首例cDNA克 ...

RNA沉默是广泛存在于生物中的一种古老现象，是生物抵抗异常DNA的一种保护机制同时在生物生长发育过程中扮演着基因表达调控的角色。文章对RNA沉默研究中的几个热点问题进行了介绍，按RNA沉默持续时间的不同对其在植物中应用的方法进行了分析，并重点论述了RNA沉默在植物功能基因组研究、作物品质改良以及抗病毒植物培育等方面的应用及其发展前景。 RNA沉默(RNAsilencing)是一种结合和降解特异mR ...

1. 对每个基因设计并检测两到四个siRNA 序列 为了找到潜在靶位点，扫描靶基因中的AA序列。记录每个AA 3’端19个核苷酸作为潜在siRNA 靶位点。潜在靶位点需通过GENBANK数据库的BLAST分析，去除那些与其它基因明显同源的靶位点。如果可能，siRNA 应根据mRNA 低二级结构的区域设计。美国著名RNA 产品公司Ambion提供网上在线设计工具，帮助您更快地完成这项工作 ...

在活体RNAi关键点：类似药物属性的引入，如稳定性、细胞内的传送、组织的生物可溶性进入合成的siRNA。

【原理】 RNA的制备与分析对于了解基因表达在转录水平上的调节是必不可少的，也是最常使用的通过cDNA途径分析细胞基因表达的前提。通常一个典型的哺乳动物细胞约含10-5μg RNA，但其中大部分为rRNA及由tRNA，而mRNA仅占1%～5%。虽然mRNA大小和序列各不相同，但在多数真核细胞mRNA的3’末端都带有一段较长的多腺苷酸链。这个群体编码了所有由该细胞合成的多肽。RN ...