核酸抽提注意事项

最糟糕的心态-实验失败了，抱怨试剂不好。实验人员本来是应该拥有修正主义、机会主义、怀疑论等诸多“不完美的”意识，所以一定要用“完美的”自我批评意识来平衡。我为什么没有一双慧眼选择可靠的供应商？我为什么不做预实验检测所购试剂？

最糟糕的知识-RNaseA的作用。RNaseA是内切酶，内切酶的作用结果是产生片段，而不是单个核苷酸，所以，RNaseA作用于RNA 的结果是：大的RNA 变成小的RNA 。为什么不同批次或者不同公司的RNaseA消化RNA 的结果不一样呢？因为RNaseA的纯度不同：RNaseA纯度越高，则RNA 残留的片段就越大！事实上，RNase的粗制品去除RNA 的效果是最彻底的，但现在几乎没有公司销售了，可能的原因，一是生产粗制品成本更高，二是其中的杂质可能对DNA 的完整性有影响。

最糟糕的试剂-水。水是所有实验都必须用到的试剂，但却没有人将她当做试剂。复旦的蒸馏原水肯定可以养鱼，因为一周就会出现蓝藻。涉及到酶反应的水，最好用去离子水。

最糟糕的仪器-分光光度仪(核酸分析仪)。太精密，也太集成，使用者在它们面前非常弱势，又不甘于弱势，于是就坚信该仪器的结果；生产商再推出更简洁的设计，到今天，分光光度仪(核酸分析仪)真的成为傻瓜仪了。常识告诉我，越是精密的东西，其对外界干扰的反应越激烈。我也没有搞懂这个东西，只是知道：给它配一个稳压电源；将它的家安在震动最小的地方-决不与离心机同台；如果出现了不可解释的结果，宁可相信仪器在发脾气。

最糟糕的操作-去除离心管中的溶液。将离心管中的液体倒掉，能倒得多彻底？不同的离心管会有不同，但残留量绝对会出乎想象的。该操作是如此的常见，强烈建议自行实验看一看：在下次做核酸抽提时，75%乙醇洗涤后离心，倒掉乙醇，再将离心管置于离心机短暂离心，看一看有多少残留液体。不要以为乙醇会挥发就无所谓，盐可不会挥发。常规实验之所以难做到100%顺利，其原因就在于没有消除前面的隐患�隐患者，偶尔为之是也。

最糟糕的遗忘-产品目录。知名公司的产品目录绝对是一个宝库。知名公司产品目录中的知识，其可靠程度远远大于参考书。当“分子克隆”与Sigma关于某一问题的解释矛盾时，我选择Sigma的解释。知名公司似乎深谙一点：在研究人员眼里，他们的知识错误更易被解释为欺骗，而参考书中的错误，我们是会宽容的；同人相轻，但只是人民内部矛盾，而与公司之间是敌我矛盾。

最糟糕的懒惰-苯酚的pH值测定。“分子克隆”、Sigma、Invitrogen都有关于Tris饱和苯酚的pH值的判断方法：“分子克隆”测酚相，Sigma测水相，Invitrogen测稀释的酚相。同一瓶Tris饱和苯酚，用这三个方法(pH试纸)测定的结果是什么样的？新版“分子克隆”改掉了上一版关于RNaseA灭活DNase操作的错误，下一版应该会改掉关于测定苯酚pH值的错误吧。