全部

Overview With this protocol transcripts that were initiated from specific genes by RNA polymerases prior to permeabilization can be measured. Instead of a nuclear extract permeabi ...

RNA extraction buffer: 0.1M NaCl 2% SDS 50mM Tris/HCl (pH9) 10mM EDTA 20mM ß-mercaptoethanol 1. Grind leaf tissue on liquid N in mortar and pestle. 2. Transfer the ground tissue to a 10ml conica ...

基因敲除和转基因动物是功能缺失表型研究的主要方法。然而，获得这些动物是一个漫长而且费用昂贵的过程，同时很多基因的缺失会导致胚胎致死表型，使得基因敲除变得不再可能。 灭活蛋白功能的方法包括结构域阴性突变构建和分析，和使用抗体和aptamers。但是，这可能需要花费一些时间确定什么构型和结构有功能，而且它们似乎只对某些靶标有作用。 有两种方法被用来调节mRNA的更新，反义mRNA和核酶（ribozym ...

Overview We design shRNA molecules with an algorithm. Our algorithm uses several criteria to rank potential 21mer targets within each human and mouse Refseq transcript. The algorithm applies a set of ...

Diethyl pyrocarbonate derivitizes histidine residues and is therefore an effective method to inactivate nucleases including RNAse. CAUTION: DEPC is irritating to the eyes skin and mucous membranes. It ...

In vitro transcription with yeast nuclear extract Steve Hahn Wear gloves throughout use RNAse free solutions (either autoclaved or sterile filtered) and clean bench and pipetmen with 95% ethanol befo ...

For quantitating RNA levels from either polyA+ selected RNA or crude RNA preps. Solutions 10X Hybridization Buffer 0.4 M PIPES 12.1 g PIPES (Sigma #P6757) 4.0 M NaCl 23.4 g NaCl 10 mM EDTA 2.0 ml 500 mM EDTA pH to 6.7 and bring up to 100 ml with DEPC treated Q, autoclave 1X Hybridization Mixture 8 ml formamide 1 ml DEPC treated Q 1 ml 10X Hybridization Buffer 2X RNase Buffer 20 mM Tris 7.5 2 ml 1M Tris 7.5 10 mM EDTA 2 ml 500 mM EDTA 8.0 0.6 M NaCl 12 ml 5 M NaCl up to 100 ml DEPC treated Q, aut

siRNA Database Searchable database of Silencer ™ Validated and Pre-designed siRNAs to >34000 human mouse and rat targets. All siRNAs in the database have been designed for maximum potency an ...

The protocols listed here are for Drosophila cells in 6 well plates and our pre-aliquoted 384 well plates. RNAi experiments may be done in other size plates just scale up or down. Adopted from Clemens ...

Polymerase III in vitro Transcription Steve Hahn last modified 10/15/99 For the following reactions use appropriate shielding and dispose of radioactive waste properly! A 20 microliter transcription r ...

为了分析特异siRNA 序列在基因活性上的效应，必须知道导入siRNA 的序列。这将要求设计合成寡核苷酸或者载体上的短的发夹RNA （siRNA ）序列，转染后检测基因的阻断。而dicer酶切的siRNA （d-siRNA ）导入细胞后，由于d-siRNA 库中通常都有好几种有效的siRNA 序列，它们在起始RNA i反应尤其有效。 然而目前还没有方法确定在这个库中起作用的特异的序列。 ...

1. Add the following to a sterile microfuge tube on ice: -1 ug linearized plasmid DNA. -2 ul Dig RNA Labeling Mix 10X concentrate -2 ul 10X transcription buffer -1-2 ul RNase inhibitor (DNase free) -a ...

alimama_pid="mm_10043573_137377_1822161"; alimama_titlecolor="FF9900"; alimama_descolor ="552c55"; alimama_bgcolor="f7f7f7"; alimama_bordercolor="f7f7f7"; alimama_linkcolor="552c55"; ...

一、目的： 学习稀碱法提RNA的原理与技术。 二、原理： 由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好地除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和 ...

第一部分 Total RNA 的提取 一、 试剂配制 准备工作： 1、研钵、5ml/10ml/ 25ml移液管、100ml/250ml量筒、250ml/100ml容量瓶、药匙、 试剂瓶等玻璃制品均用锡纸包裹口部，置于烤箱内180℃，烤6小时。 2、50ml/1.5ml离心管、枪头等塑料制品用0.1‰DEPC水浸泡过夜后，121℃ 20mins 高压灭菌。 3、电泳槽及电泳托、梳子 ...

第三节 植物病毒RNA 提取 大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 一、材料 提纯TMV病毒液（10mg/ml）。 二、设备 冷冻台式离心机，低温真空干燥仪，电泳仪，电泳槽。 三、试剂 TE-饱和酚:氯仿（1:1），氯仿，3M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE缓冲液，无RNA 酶的 ...

Rnai 最近由于RNA 干扰（RNA interference，RNA i）的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的（1），是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在RNA i领域取得的进步，已经有许多这方面的综述发表（2-4）。RNA 干扰是由长的双链RNA 分子发动的，该分子可以被Dicer enzyme加工成长度为21-23个核苷酸的RNA （ ...

信号通路，只有一个目的：将细胞的外部信号转换成细胞的内部变化。不管是胰岛素，还是异亮氨酸，抗原还是肾上腺素，它们的终极目的总是如出一则：对转录活性的改变。这些对于转录活性的影响来自于转录因子与基因的调控区域：如启动子、增强子、沉默子等结合达到的。经典的凝胶迁移滞后试验（theelectrophoreticmobilityshiftassay）已经成为证明某种蛋白能与特定的短基因序列结合的有力方法手段。但是凝胶迁 ...

第二节 动植物组织mRNA 提取 一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织。 二、设备 研钵，冷冻台式高速离心机，低温冰箱，冷冻真空干燥器，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。 三、试剂 1、无RNA 酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 2、75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制），然后装 ...

与rRNA 和tRNA 不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA 在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA 中分离mRNA dmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA 模板。 进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析时，与总RNA 相比，采用poly(A)+ RN ...