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        沉淀反应:对流免疫电泳实验

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        免疫电泳实验

        免疫电泳实验是先将抗原物质在琼脂凝胶中做电泳分离,然后于凝胶槽中加入抗体血清。使抗原抗体进行双向扩散,在比例适宜部位形成特异的抗原抗体沉淀弧线。每条沉淀弧线代表一组抗原抗体复合物,故可用抗原成分分析;且可以根据其迁移率与抗体所出现的特异反应进行鉴定。

        1、材料

        (1)待检标本(抗原):正常人血清;

        (2)抗体:正常人血清的家兔免疫血清;

        (3)1.5%离子琼脂(系用巴比妥缓冲液配制的);

        (4)电泳仪;

        (5)pH8.6、离子强度0.05M巴比妥缓冲液配方:巴比妥1.84克,巴比妥钠10.3克,加蒸馏水1000毫升,调pH至8.6;

        (6)其它:载物玻片,直径3毫米打孔器,20mmⅹ2mm玻璃铸型,微量进样器。

        2、方法

        (1)取载物玻片(7.5ⅹ2.5厘米)加上3.5毫升1.5%琼脂凝胶,制成2毫米厚的琼脂板;

        (2)按图位置,在琼脂板未凝固时,放入抗血清槽铸型,注意勿使铸型全部浸入琼脂中,待凝固时再打孔;

        (3)加待检标本:用微量进样器往孔中加1—5微升;

        (4)电泳:电压9—7伏/厘米,泳动15—20小时;

        (5)电泳后取出抗血清槽铸型,加入抗血清,进行双扩散,一般在24小时内沉淀弧出全;

        (6)观察结果:或描绘、拍照或进行染色,染色后的标本便于结果分析及保存。

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