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RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。 可能原因： 1、RNA被降解 建议解决方法 在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污染技术分离RNA； 在将组织从动物体取出后立刻处理在100％甲酰胺中储存RNA； 如果使用胎盘RNase抑制剂，不要加热超过45℃或pH超过8.0，否则抑制剂或释放所有结合的RNase.而且，在≥0.8mM DT ...

热启动PCR 热启动PCR是除了好的引物设计之外，提高PCR特异性最重要的方法之一。尽管Taq DNA聚合酶的最佳延伸温度在72℃，聚合酶在室温仍然有活性。因此，在进行PCR反应配制过程中，以及在热循环刚开始，保温温度低于退火温度时会产生非特异性的产物。这些非特异性产物一旦形成，就会被有效扩增。在用于引物设计的位点因为遗传元件的定位而受限时，如site-directed突变、表达克隆或用于DNA工 ...

1、引物设计由美国Perkin-elmer公司合成，引物末端标记有生物素。 （1）扩增体系 10×PCR buffer 5μl PCR引物&n ...

程序： 1 倒置显微镜中最常用的观察方法就是相差。由于这种方法不要求染色，是观察活细胞和微生物的理想方法。在此提供各种聚光器来满足需要，这种方法提供带有自然背景色的、高对比度的、高清晰度的图像。 2 开机 2.1 接连电源。 2.2 ...

1、低倍镜的使用 （1）检查：右手握镜臂，从镜箱内取出显微镜，左手托镜座，轻轻放在实验桌上。先检查一下显微镜各部件有无损坏，如发现有损坏或性能不良者，立即报告教师请求处理。 （2）准备：将显微镜放于前方略偏左侧，必要时使镜筒倾斜（有的显微镜本身已经倾斜）以便观察。转动粗调节钮，将镜筒略升高（或将载物台下降）使物镜与载物台距离略拉开。再旋转物镜转换器，将低倍镜对准载物台中央的通光孔（可听到&ldqu ...

多聚酶链式反应(polymerase chain reaction)简称PCR技术，是80年代中期发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术。此法操作简便， 可在短时间内在试管中获得数百万个特异的目的DNA序列的拷贝，PCR技术虽然问世仅数年时间， 但它已迅速渗透到分子生物学的各个领域，引起了生物技术发展的一次革命. 目前它在分子克隆， 目的基础检测，遗传病的基因诊断，法医学，考古学等方面得到了广 ...

免疫细胞化学的发展对许多领域的研究起到很大的推动作用，在神经科学的研究中尤为突出。本文仅就免疫细胞化学在神经科学的基础研究方面的应用做一简单介绍。 一、确定神经递质的性质、定性和分布 早期的神经科学工作者应用传统的神经解剖学研究方法如甲基蓝染色法、镀银染色法等对中枢及外周神经系统的结构做了大量的研究工作，但由于技术方法的限制，对神经递质的性质无法确定。1949年Koelle建立了胆碱酯酶染色法（ ...

Designing PCR primers 1.length of individual primers between 18-24 bases. Longer primers (30-35 bp) seem to work in more similar cycling conditions compared with shorter primers and can make multiplex ...

1.DMSO and glycerol Recommended by a number of authors to improve amplification efficiency and specificity of PCR. Howeverin the multiplex reaction these enhancers gave conflicting results.For example ...

1.Introduction Polymerase chain reaction (PCR) has rapidly become one of the most widely used techniques in molecular biology and for good reason: it is a rapid inexpensive and simple means of produci ...

1.protocol (1)collect piece of tissue (e.g. pieces of a leaf or flower) in Eppendorf tube containing 40 ml 0.25 N NaOH (2)put in boiling H2O for 30 sec (optimum may need to be determined for each type ...

1．1935年卡尔－费休（KarlFischer）首先提出了利用容量分析测定水分的方法，这种方法即是GB6283《化工产品中水分含量的测定》中的目测法。目测法只能测定无色液体物质的水分。后来，又发展为电量法。随着科技的发展，继而又将库仑计与容量法结合起来推出库仑法。这种方法即是GB7600《运行中变压器油水分含量测定法（库仑法）》中的测试方法。现在的分类目测法和电量法统称为容量法。卡氏方法分为卡氏 ...

一、原理： 　　本仪器为卡尔·费休（Kart Fischer）容量滴定法测定水份含量的仪器，采用“永停法”来确定终点。 根据半电池反应：I2＋2e<=>2Iˉ ，溶液中同时存在I2及Iˉ时上述反应分别在两个电极上进行，即在一个电极上I2被还原，而再另一个电 极上Iˉ被氧化，因此在两个电极之间有电流通过。如果溶液中只有Iˉ而无I2则电极间 ...

1.protocol (1)collect piece of tissue (e.g. pieces of a leaf or flower) in Eppendorf tube containing 40 ml 0.25 N NaOH (2)put in boiling H2Ofor 30 sec (optimum may need to be determined for each type ...

Steven Finkbeiner Departments of Neurology and Physiology UCSF Protocol note: hood scgedule for day of transfection: - 6h gap - CELLS: Polylysine coat plates. add 5ml polylysine per 100mm plat ...

Principle: Lymphocytes are transformed to establish cell lines. Mononuclear cells (lymphocytes) from anticoagulated venous blood are isolated by layering onto histopaque. During centrifugation eryth ...

Chen-Ming Fan LabCarnegie Institute of Washington Prepare cell lysate as you would for Luciferase assay. Take 50uL of lysate and dilute with 100uL of 1X Reporter Lysis buffer (brown bottle at room ...

Seed cells at appropriate density (5x104/well for 3T3 MPAC BHK; 5x105/well for aTC1.6 bTC3) one to two days before transfection. Combine total DNA at 1ug /well with 600ul/well serum-free medium in an ...

Transfect 5 ug of the desired plasmid to the desired adherent cell line. Transfect in parallel GFP and carrier DNA (total of 5 ug). 48hrs after transfection check for transfection efficiency. Takin ...

一、基本概念 (一)基因导入(或基因转导) 将外源性基因(或基因组DNA)采用分子生物学技术人工地导入细胞，观察它在细胞中的表达，研究其生物学特性和功能，这种把基因导入细胞中的技术称为基因转导(gent transfer)或称基因转移，也简称为导入。是研究基因表达、结构和功能的重要研究手段。 (二)基因转导的种类： 目前基因转导技术很多，可根 ...